因此，本研究在前期研究的基础上，通过体外实验探讨岩大戟内酯B是否能够诱导白血病细胞自噬、自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)及自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)是否能够影响岩大戟内酯B所致的白血病细胞的凋亡。初步探讨岩大戟内酯B能否诱导HL-60细胞自噬并观察调控自噬对岩大戟内酯B诱导的白血病细胞凋亡的影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂及仪器

    RPMI 1640培养基、胎牛血清购自Gibco公司；3-MA和RAPA购自Sigma公司；自噬相关抗体LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、β-actin及其他试剂均为武汉博士德生物工程公司产品；流式细胞仪为美国Backman公司产品；离心机购自德国Eppendorf公司；HL-60细胞购自中国科学院上海细胞库。

    1.2 细胞培养

    HL-60细胞在含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中，37℃，5%的CO2培养箱中培养。

    1.3 Western blot检测白血病细胞HL-60自噬调节蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的表达

    采用岩大戟内酯B分别处理HL-60细胞24、48、72 h或采用浓度分别为0、20、40、80 μg/mL岩大戟内酯B处理HL-60细胞48 h后 ......