siRNA干扰Rac1表达对人晶状体上皮细胞增殖和迁移能力的影响(2)
1 材料与方法1.1 材料
1.1.1 细胞培养与分组 SRA01/04购自中国医学科学院肿瘤细胞库,培养液为添加10%胎牛血清(美国,Gibco)的DMEM培养基(中国,吉诺),置于37℃、5%CO2培养箱中培养。转染前1 d将处于对数生长期的SRA01/04细胞分为转染空白组(Mock组)和基因沉默组(siRac1组),以5×105个/孔的浓度分别接种于6孔板中,每孔均添加2 mL无抗生素培养基,确定细胞平铺均匀。
1.1.2 试剂与耗材 siRNA购自上海吉玛公司,siRac1正义序列为5′-GGGAUGAUAAAGACACGAUTT-3′,反义序列为5′-AUCGUGUCUUUAUCAUCCCTT-3′;OPTI-MEMI(中国,吉诺);Lipofectamin 2000(美国,Invitrogen)。
1.2 方法
1.2.1 细胞转染 将1 OD siRac1加入150 μL DEPC水中 ......
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