1.2.4 Western blot测蛋白表达量差异 取对数生长期huh7细胞，接种于6孔板，待细胞贴壁24 h后，用不同药物浓度(0、2.5、5、10、20和40 μmol /L)处理24 h。加入 4℃预冷的细胞裂解缓冲液100 μL后，冰上作用30 min。用细胞刮刀刮取细胞碎片和裂解产物，移入1.5 mL离心管。用超声波细胞粉碎机粉碎上述产物后，4℃ 12 000 g/min高速冷冻离心20 min。BCA检测法检测蛋白浓度，用细胞裂解缓冲液调整各组间的蛋白浓度，使其一致，加入上样缓冲液，100℃加热5 min。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)凝胶电泳，将分离后蛋白电泳转移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上，5%脱脂奶粉封闭1 h，洗膜3次后分别加入一抗(Akt、p-Akt、β-catenin及GAPDH)4℃摇床过夜孵育12 h，而后洗膜3次，加入二抗于摇床作用1 h，再次洗膜3次，于Odyssey上扫膜 ......