1.2.4 实时荧光定量PCR法 ①海马组织中总RNA的提取。用加入β-巯基乙醇的Buffer GTC裂解海马组织，加入焦碳酸二乙酯(diethyl pyrocarbonate，DEPC)水，充分混匀。加入蛋白酶K进行裂解，并充分混匀，在55℃水浴锅中温育10 min。在室温下，离心样品，将上清液加入gDNA柱，离心。在裂解产物中加入50%体积的无水乙醇，混匀。样品转入到HiBind RNA Mini Column上，室温离心，弃去液体。用RNA wash Buffer Ⅰ、RNA wash Buffer Ⅱ洗柱。用65℃水浴锅预热的DEPC水洗脱柱子，离心。②逆转录为cDNA。10 μL的RNA template(2 μg/μL)、3 μL的RT引物工作液(62.5 nmol/L)混合，离心，然后放入PCR仪中，在65℃下，反应10 min。随后冰浴2 min。4 μL的RT buffer(5×)、0.5 μL的RNase inhibitor(40 μg/μL)、2 μL的dNTP mix(2.5 mmol/L)、0.5 μL的RT酶(200 μg/μL)混合 ......