人脐带血间充质干细胞通过抑制MEK/ERK通路改善LPS诱导的AECⅡ凋亡机制的研究(3)
1.2.5.2 Western blot检测 采用Western blot检测其中A549+LPS+MSC、A549+LPS+PBS、A549+PBS、A549+MSC四组细胞内FAS、BAX、BCL-2、TNF-R1、caspase 3、cleaved caspase 3、p-MEK、p-ERK表达水平。细胞总蛋白提取，使用RIPA裂解缓冲液提取蛋白质，并对蛋白质含量进行定量。将样品(30 μg等蛋白)进行SDS-PAGE，然后转移到PVDF膜上。针对FAS、BAX、BCL-2、TNF-R1、caspase 3、cleaved caspase 3、p-MEK、p-ERK的一抗探测探针，随后与辣根过氧化物酶(HRP)偶联的抗兔二抗(1∶2000)。采用兔单克隆抗β-actin作为上样对照。Quantity One软件分析各蛋白条带灰度值。以目标蛋白与内参β-actin灰度值比值代表各蛋白的相对表达水平 ......
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