CDCA3在肝细胞肝癌增殖中的作用研究(3)
选取(3~4)×104个/mL的肝癌细胞接种于96孔板中,待细胞贴壁后对细胞进行干预实验,设置3个重复孔。细胞干预48 h后,弃培养基,加入按照1000∶1的比例稀释EdU溶液(CA1170,锐博生物,中国)孵育2 h,弃培养液,用磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)(Hyclone,美国)清洗2遍。每孔中加入50 μL 4%多聚甲醛(谷歌生物,中国)室温孵育20 min后,弃废液;每孔加入50 μL甘氨酸溶液(CA1170,锐博生物,中国),清洗5 min,弃废液;用PBS清洗5 min,弃废液;每孔加入100 μL渗透剂(0.5% Tritonx-100的PBS)脱色摇床孵育10 min,PBS清洗5 min,弃废液;每孔中加入100 μL的1×Apollo染色反应液(CA1170,锐博生物,中国),室温下避光,置于脱色摇床上孵育30 min,弃废液;加入100 μL渗透剂脱色摇床清洗2~3次,每次5 min,PBS清洗5 min;每孔加入100 μL 1×Hochest反应液 ......
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