1.10 免疫组化检测大鼠肺组织中PI3K、EGFR蛋白表达

    每组取6只大鼠，颈椎脱臼处死后分离肺组织，用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，进行3 μm切片。切片常规脱蜡至水，3%双氧水室温封闭20 min，枸橼酸盐缓冲液加热抗原修复，5%胎牛血清(BSA)封闭，37℃下放置30 min，滴加稀释的PI3K、EGFR一抗(1∶200)，4℃过夜。次日使用磷酸缓冲盐溶液(PBS)冲洗后，依操作顺序加入二抗(1∶100稀释)，37℃孵育15 min，PBS液冲洗;滴加辣根酶标记链霉卵白素(试剂C)，37℃孵育15 min，PBS液冲洗;室温DAB显色，封片后应用显微镜观察，每一标本随机选取5个视野，在细胞浆内或细胞核内出现黄、棕色颗粒为阳性细胞，并计算免疫组化积分。将阳性细胞按染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;再按阳性细胞所占的百分比进行评分，0分为阴性，1分为0%<阳性细胞比例≤10%，2分为10%<阳性细胞比例≤50%，3分为50%<阳性细胞比例≤75%，4分为75%<阳性细胞比例≤100%;两者的乘积为免疫组化表达积分 ......