长链非编码RNAROR1-AS1促进骨肉瘤细胞侵袭的机制研究(2)
1.2 细胞培养含10%胎牛血清的DMEM培养基(含青链霉素)培养细胞,克隆至70%~80%更换培养基;培养箱条件:37℃、50 mL/L CO2。
1.3 RT-PCR
检测各细胞株中lncRNA ROR1-AS1的表达。TRIzol法提总RNA,并检测纯度及浓度。依据TaKaRa公司说明书进行逆转录和PCR反应。反应体系20 μL: 2×SYBR Premix Ex Taq 10 μL;上、下游引物各0.4 μL;cDNA 5 μL;双蒸水4.2 μL。设定程序为两步法RT-PCR:预变性 95℃,1 min;之后每一步变性95℃,5 s;退火延伸 60℃,20 s;共进行40个循环。每次在延伸阶段读取吸光值。lncRNA ROR1-AS1的上游引物序列为5′-CTGACGAAACACTGGAACTC-3′,下游引物序列为5′-GTCTGATTTGGTAGCTTGGATG-3′;ROR1的上游引物序列为5′-CAGATGAGTATGAAGAAGATGG-3′ ......
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