孟庆坤 谭 昊 顾 卉 骆佳莹 王菁菁 王传合 韩 苏 孙志军*

    心肌梗死是一种致命性疾病，是人类致死的重要原因[1]。在心肌梗死病理生理变化过程中，心肌细胞缺血缺氧引起的心肌细胞凋亡对疾病进展及预后起重要作用。而心肌细胞的凋亡与基因表达的调节密切相关[2]。长链非编码RNA(lncRNA)是一类不具备编码蛋白质的，转录长度>200 nt的非编码RNA[3]，在心肌梗死的病理生理过程中发挥重要作用[4-8]。基于之前的研究发现，lncRNA在大鼠心肌梗死边缘区有大量差异表达，以及通过生物信息学分析发现lncRNA存在多种潜在病理机制作用[9]。为了模拟心肌缺血缺氧状态，本研究采用低糖缺氧处理大鼠H9C2细胞，选取lncRNA芯片中差异表达显著的NR_027324作为研究对象，验证在低糖缺氧H9C2细胞模型中NR_027324的变化，以及与凋亡的关系。通过观察沉默NR_027324对心肌细胞凋亡的影响，以探讨NR_027324调节心肌细胞凋亡的作用机制，为防治心肌梗死后心肌细胞凋亡提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    大鼠H9C2心肌细胞购自万类生物技术有限公司。si-RNA载体由万类生物技术有限公司合成。转染试剂Lipofectamine TM2000：Invitrogen，Thermo Fisher Scientific，Inc.，美国。DMEM培养基：Gibco;Thermo Fisher Scientific, Inc.，Waltham，MA，美国。胎牛血清：FBS；EverGreen，浙江天杭生物科技有限公司。TRIpure试剂(Cat. No. RP1001)：北京百泰克生物技术有限公司。Super M-MLV 反转录酶(Cat. No. PR6502)：北京BioTeke Corporation。SYBR GREEN mastermix(Cat. No. SY1020)：北京索莱宝科技有限公司。特异性引物：上海生工生物科技。全蛋白提取试剂盒(cat. no. WLA019)、BCA蛋白浓度测定试剂盒(cat.no.WLA004)：万类生物技术有限公司。Bax，Bcl-2，cleaved caspase-3，cleaved caspase-9抗体：万类生物技术有限公司。辣根过氧化物酶标记的二抗：万类生物技术有限公司。ECL化学发光试剂盒：万类生物技术有限公司。乳酸脱氢酶测定试剂盒(cat.no. WLA072)：万类生物技术有限公司 ......