叶宝玉 莫小丹 李 蔚 刘俊文

    中药饮片微生物限度检查法系2020 年版《中华人民共和国药典》通则1108 新增[1-2]，该方法可用于检查中药材、中药饮片微生物污染情况[3]。熟地黄性微温，味甘，可补益肝肾，滋阴养血，是治疗痹证的经典药物[4]，药用历史久远，是我国广泛使用的养生保健、防病治病的中药材。熟地黄富含氨基酸、糖类、地黄素、梓醇等多种微量元素，具有提高机体免疫力、抗氧化、抗衰老、促进造血等作用[5-6]。也有相关研究显示其具有抑制氧化应激、细胞凋亡的特性[7-9]。现代药理研究表明，熟地黄的主要作用成分为天然大分子化合物熟地黄多糖，其在调节内分泌系统、治疗心血管疾病、降血糖、提高免疫力、抗炎、镇咳、抗真菌等方面具有良好的效果[10]。本研究旨在通过对熟地黄微生物限度方法适用性研究，并建立相应的微生物限度检查方法，防止因检验方法的不科学造成错检或误判[11-12]，确保有关熟地黄饮片药物生物安全性评价的可靠性。

    1 仪器与样品

    1.1 仪器

    电子天平 MP500B(1/100，上海恒平科学仪器有限公司)，高压灭菌器 GF88DX(致微厦门仪器有限公司)，SW-CJ 系列洁净工作台SW-CJ-2FD(苏州安泰空气技术有限公司)，生化培养箱HPX-Ⅱ-250(上海跃进医疗器械有限公司)，霉菌培养箱HMJ-Ⅲ-250(上海跃进医疗器械有限公司)，电热恒温培养箱DHP-9082B(上海一恒温培养箱)，移液器(Thermo Scientific)。

    1.2 菌种

    金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、乙型副伤寒沙门氏菌[CMCC(B)50094]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003]均由广东环凯微生物科技有限公司提供。本实验用的菌种均为第三代工作菌株 ......