丙型肝炎病毒核心蛋白基因真核表达质粒的构建和表达
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张景霞 苏海霞 张磊 李端 闫永平 肖丹 卢娟 门可 第四军医大学预防医学系流行病学教研室 第四军医大学预防医学系流行病学教研室 第四军医大学预防医学系流行病学教研室 第四军医大学预防医学系流行病学教研室 第四军医大学预防医学系流行病学教研室 第四军医大学预防医学系流行病学教研室 第四军医大学预防医学系流行病学教研室 第四军医大学预防医学系流行病学教研室
【摘要】目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白真核表达质粒,并在HepG2细胞中稳定表达。方法:采用RT-RCR方法从丙型肝炎患者血清中得到HCVC区的cDNA序列,然后克隆入pcDNA3.0载体,构建真核表达质粒pcDNA-HCV,并进行酶切鉴定和测序鉴定;采用脂质体转染技术将pcDNA-HCV稳定转染于HepG2细胞系,并用G-418进行筛选;采用Western Blotting方法和免疫细胞化学方法检测HepG2细胞中HCV核心蛋白表达情况。结果:从HCV感染者血清中扩增得到的503bp HCV cDNA序列,属于HCV 1型基因C区,并成功构建了真核表达质粒pcDNA-HCV经Western blotting和免疫细胞化学检测,稳定转染的HepG2细胞中有HCV核心蛋白的表达结论:成功构建HCV核心蛋白真核表达质粒pcDNA-HCV,并可以在真核细胞HepG2中稳定表达
【关键词】 丙型肝炎病毒 核心蛋白 真核表达
【基金】国家自然科学基金项目(编号：30170824)
【分类号】R512.63
孟~.‘，口压，侧一.‘~，~~~夕~、~~~~/~~~~~~~~ HCV的核心蛋自(CORE)不仅作为结构蛋l勺包裹病毒核酸、形成病毒的核衣壳}’{，而目.可以通过多种途径[23]抑制宿主对病毒感染的防御反应，参与细胞中的多条信号转导通路，调节细胞的生长周期等l#]Li等l5]在对HCV自我调节机制
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摘要目的：构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白真核表达质粒，并在HepG2 细胞中稳定表达。方法：采用RT-RCR 方法从丙型肝炎患者血清中得到HCV C区的cDNA序列，然后克隆入pcDNA3.0 载体，构建真核表达质粒pcDNA-HCV，并进行酶切鉴定和测序鉴定；采用脂质体转染技术将pcDNA-HCV 稳定转染于HepG2 细胞系，并用G-418 进行筛选；采用Western Blotting 方法和免疫细胞化学方法检测HepG2 细胞中HCV 核心蛋白表达情况。结果：从HCV 感染者血清中扩增得到的503bp HCV cDNA序列，属于HCV 1型基因C区，并成功构建了真核表达质粒pcDNA-HCV。经Western blotting 和免疫细胞化学检测，稳定转染的HepG2 细胞中有HCV 核心蛋白的表达。结论：成功构建HCV 核心蛋白真核表达质粒pcDNA-HCV，并可以在真核细胞HepG2中稳定表达。
关键词：丙型肝炎病毒；核心蛋白；真核表达
中图分类号：R512.63 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)02-0233-03
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