产气肠杆菌菌体内核苷磷酸化酶的诱导表达
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魏晓琨 刘岩岩 周丽娜 丁庆豹 王昌禄 天津科技大学生物工程学院
【摘要】目的:阿糖腺苷(Ara-A)是一种广谱抗病毒药物,临床上用于治疗多种病毒性疾病,同时也是合成阿糖腺苷单磷酸(Ara-AMP)的重要原料、本课题旨在寻找一种高效酶法生产嘌呤类阿糖核苷的方法。方法:以产气肠杆菌完整细胞为酶源,研究产气肠杆菌菌体培养条件对核苷磷酸化酶的影响及其诱导性。结果:胸苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶均可被多种核苷、核苷酸甚至碱基诱导。胞苷或胞苷酸的添加量为15-20mmol/L,诱导时间在0-8小时均可。经胞苷和胞苷酸诱导的菌体可使酶反应时间缩短6倍,大大提高了反应效率。经诱导的菌体,在反应后仍保持较高的核苷磷酸化酶活力:而未经诱导的菌体,一次反应后即丧失大量的酶活力。结论:核苷磷酸化酶的活性可以通过诱导而提高,以此优化阿糖腺苷的生产。
【关键词】 产气肠杆菌 核苷磷酸化酶 诱导 阿糖腺苷
【基金】科技部中国科技型中小企业创新基金(07C26213100222)
【分类号】TQ460.1
glJ吕核普及其类似物的合成大都是由崛咙核什磷酸化酶和镖吟核伴磷酸化酶催化的根合反应进行核营磷酸化酶是核昔酸代谢补救途径中的重要酶类，广泛存在于生物细胞当中对哺乳动物细胞及微生物中核营磷酸化酶的编码基因、蛋自结构、催化机理等已进行了大量研究卜3了，关于核昔
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摘要目的：阿糖腺苷(Ara-A)是一种广谱抗病毒药物，临床上用于治疗多种病毒性疾病，同时也是合成阿糖腺苷单磷酸(Ara-AMP)的重要原料。本课题旨在寻找一种高效酶法生产嘌呤类阿糖核苷的方法。方法：以产气肠杆菌完整细胞为酶源，研究产气肠杆菌菌体培养条件对核苷磷酸化酶的影响及其诱导性。结果：胸苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶均可被多种核苷、核苷酸甚至碱基诱导。胞苷或胞苷酸的添加量为15-20 mmol/L，诱导时间在0-8小时均可。经胞苷和胞苷酸诱导的菌体可使酶反应时间缩短6 倍，大大提高了反应效率。经诱导的菌体，在反应后仍保持较高的核苷磷酸化酶活力；而未经诱导的菌体，一次反应后即丧失大量的酶活力。结论：核苷磷酸化酶的活性可以通过诱导而提高，以此优化阿糖腺苷的生产。
关键词：产气肠杆菌；核苷磷酸化酶；诱导；阿糖腺苷
中图分类号：R978.7 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)02-0255-04
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