GST-hDSL重组蛋白的原核表达纯化及对人造血祖细胞的扩增作用
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林小娟 黄薇薇 赵梅 姜俊芬 郭凌晨 吴明媛 韩伟 上海交通大学药学院再生医药学研究室 上海交通大学药学院再生医药学研究室
【摘要】目的:原核表达DSL与谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白并研究观察GST-hDSL对人脐带血CD34~+造血祖细胞的体外扩增作用。方法:将人DSL cDNA的蛋白编码序列克隆入原核表达载体pGEX-2T中,在大肠杆茵DH5α中诱导表达融合蛋白,用DEAE阴离子交换柱纯化目的蛋白。然后分离、纯化脐带血CD34~+造血祖细胞,不加细胞因子或加入SCF(干细胞生长因子,stem cell factor)和GM-CSF(粒-巨噬细胞集落刺激因子,granulocyte-macrophage colony-stimulating factor),经过14天的培养,检测GST-hDSL对细胞总数、CD~(34+)细胞百分率、以及集落形成的影响。结果:当SCF和GM-CSF存在时,GST-hDSL组的CD34~+细胞百分率,集落(colony forming cells,CFC)数以及高增值潜能集落(high proliferative potential colonyformning cells,HPP-CFC)数分别是对照组的1.9、1.2、5.3倍。结论:当与SCF和GM-CSF联合作用时,重组GST-hDSL蛋白对造血祖细胞具有扩增作用。
【关键词】 GST_hDSL Notch通路 造血祖细胞
【基金】上海市科委重大科技攻关项目资助(No.04DZ19203) 上海市浦江人才计划项目资助(No.05PJ14074)
【分类号】Q78
前言Noteh信号通路是被广泛应用的，进化高度保守的细胞分化调节系统，在许多发育系统中对细胞的命运决定起着重要的调节作用〔，一]。Noteh通路由Noteh受体、Noteh配体以及细胞内效应分子组成。一系列的研究证明Notch受体广泛表达于造血干/祖细胞以及成熟的血细胞，Notch配
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摘要目的：原核表达DSL与谷胱甘肽S 转移酶(GST)的融合蛋白并研究观察GST-hDSL 对人脐带血CD34+造血祖细胞的体外扩增作用。方法：将人DSL cDNA 的蛋白编码序列克隆入原核表达载体pGEX-2T 中, 在大肠杆菌DH5琢中诱导表达融合蛋白，用DEAE 阴离子交换柱纯化目的蛋白。然后分离、纯化脐带血CD34+造血祖细胞，不加细胞因子或加入SCF(干细胞生长因子，stemcell factor)和GM-CSF(粒- 巨噬细胞集落刺激因子，granulocyte-macrophage colony-stimulating factor)，经过14 天的培养，检测GST-hDSL对细胞总数、CD34+细胞百分率、以及集落形成的影响。结果：当SCF和GM-CSF存在时，GST-hDSL组的CD34+细胞百分率，集落(colony forming cells, CFC)数以及高增值潜能集落(high proliferative potential colony forming cells，HPP-CFC)数分别是对照组的1.9、1.2、5.3 倍。结论：当与SCF和GM-CSF联合作用时，重组GST-hDSL蛋白对造血祖细胞具有扩增作用。
关键词：GST-hDSL；Notch通路；造血祖细胞
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