人HIF-1αmiRNA干扰质粒的构建及其在Lovo细胞中有效性的检测
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摘要目的: 构建人HIF-1α的miRNA 特异性干扰表达载体并转染人结肠癌Lovo 细胞检测其有效性。方法: 设计合成针对人HIF-1琢基因的特异性miRNA 前体寡核苷酸，依次通过退火、连接，构建含HIF-1α前体miRNA 的重组干扰质粒pcDNA?6.2-GW/EmGFP-HIF-1α-miR，并转染人结肠癌Lovo 细胞，经半定量RT-PCR 技术鉴定其干扰有效性。结果: 经双酶切及测序鉴定，针对人HIF-1α基因的两组miRNA 干扰质粒构建成功，并能够有效抑制人结肠癌Lovo 细胞中HIF-1αmRNA 表达。结论: 成功构建针对人HIF-1α基因的miRNA特异性有效干扰质粒，为后续HIF-1琢基因慢病毒miRNA表达载体的构建及其在结肠癌多药耐药中的相关功能研究奠定基础。
关键词：缺氧诱导因子-1α；微小RNA；RNA 干扰；结肠癌；Lovo 细胞
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