人肝癌细胞系HepG2中survivin-3鉴定及其真核载体构建
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徐兵 杨来华 丹阳市中医院普通内科 丹阳市中医院放疗科
【摘要】目的:鉴定肝癌细胞系HepG2中survivin异构体(survivin variant,SVV variant)并构建其真核表达载体。方法:提取HepG2细胞总RNA,根据Gen-Bank内survivin 3个异构体核苷酸序列设计3条引物对其进行鉴定;设计含有BamHⅠ和XhoⅠ双酶切位点的SVV-3引物,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增SVV-3完整编码区,扩增产物用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到真核细胞表达栽体pcDNA3.1中,序列测定进行鉴定。结果:HepG2细胞表达SVV-3、1,SVV-3表达尤为丰富。对SVV-3克隆测序,与Gen-Bank报道完全一致。结论:成功鉴定出HepG2表达SVV-3、1,构建了SVV-3真核表达载体。
【关键词】 SVV 真核表达载体 HepG
【分类号】R735.7
肿瘤发生是一个多阶段、多步骤、多基因累计受损的结果。其中肿瘤细胞增值过度且凋亡不足是其发病的一个重要机制。sVV是细胞凋亡抑制蛋白(inhibitor of叩叩tosis protein，L气p)家族中的一员l，]，通过抑制凋亡下游easpase一3、easpase一7活化抑制肿瘤细胞凋亡圈。已经有报
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摘要目的: 鉴定肝癌细胞系HepG2 中survivin 异构体(survivin variant，SVV variant)并构建其真核表达载体。方法: 提取HepG2细胞总RNA，根据Gen-Bank 内survivin 3 个异构体核苷酸序列设计3 条引物对其进行鉴定；设计含有BamHⅠ和XhoⅠ双酶切位点的SVV-3 引物，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增SVV-3 完整编码区，扩增产物用BamHI 和XhoI 双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1 中, 序列测定进行鉴定。结果: HepG2 细胞表达SVV-3、1，SVV-3 表达尤为丰富。对SVV-3 克隆测序，与Gen-Bank 报道完全一致。结论: 成功鉴定出HepG2 表达SVV-3、1，构建了SVV-3 真核表达载体。
关键词：SVV；真核表达载体；HepG2
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