结核分枝杆菌Rv2461c基因的克隆、表达、纯化及其抗原性的初步检测
clpP蛋白,Rvc,蛋白表达,亚细胞定位
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王庆忠 张鹭 马国举 廖海印 王洪海 上海市临床检验中心;复旦大学生命科学学院遗传学研究所、遗传工程国家重点实验室;齐齐哈尔大学生命科学与工程学院;
【摘要】目的:探索结核分枝杆菌Rv2461c基因编码的clpP蛋白作为结核检测抗原的可行性。方法:克隆结核分枝杆菌clpP蛋白的编码基因Rv2461c,构建pET30a-Rv2461c重组质粒,并将其成功的转化到大肠杆菌JF1125克隆载体中,测序鉴定结果正确。将pET30a-Rv2461 c重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,表达纯化目的蛋白进行质谱分析.制备clpP蛋白的多克隆抗体,通过亚细胞分离及Western检测分析蛋白的亚细胞定位,纯化的clpP蛋白通过间接ELISA实验进行抗原性的初步检测。结果:结核分枝杆菌clpP蛋白大量存在于细胞质中,少量存在于细胞壁和细胞膜中。重组抗原在检测肺结核病人中的检出率为38.3%(23/60),检测敏感性为38.3%,特异性为90%。结论:为后续深入研究clpP蛋白的生物功能、clpP作为诊断靶标、药靶候选蛋白的可行性提供了基础。
【关键词】 结核分枝杆菌 clpP蛋白 Rvc 蛋白表达 亚细胞定位
【基金】国家973国家基础研究计划(2005CB523102) 中国博士后科学基金(20070410688)
【分类号】R378;Q789
前言自20世纪80年代以来，结核病的疫情有重新上升的趋势，特别是耐药、耐多药(MDR)和极端耐药(XDR)菌株在全球范围的不断出现和广泛传播，使结核病成为当前世界性的严重公共卫生问题!，一气2006年3月国家卫生部疫情通报，结核病的发病数和死亡数都居于首位，尤其我国每年新
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摘要目的：探索结核分枝杆菌Rv2461c 基因编码的clpP 蛋白作为结核检测抗原的可行性。方法：克隆结核分枝杆菌clpP蛋白的编码基因Rv2461c，构建pET30a-Rv2461c 重组质粒，并将其成功的转化到大肠杆菌JF1125 克隆载体中，测序鉴定结果正确。将pET30a-Rv2461c 重组质粒转化到大肠杆菌BL21 中，表达纯化目的蛋白进行质谱分析。制备clpP 蛋白的多克隆抗体，通过亚细胞分离及Western 检测分析蛋白的亚细胞定位，纯化的clpP 蛋白通过间接ELISA 实验进行抗原性的初步检测。结果：结核分枝杆菌clpP 蛋白大量存在于细胞质中，少量存在于细胞壁和细胞膜中。重组抗原在检测肺结核病人中的检出率为38.3%(23/60)，检测敏感性为38.3%，特异性为90%。结论：为后续深入研究clpP蛋白的生物功能、clpP作为诊断靶标、药靶候选蛋白的可行性提供了基础。
关键词：结核分枝杆菌；clpP 蛋白；Rv2461c；蛋白表达；亚细胞定位
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