金黄色葡萄球菌一氧化氮合酶基因(nos)缺失突变株的构建
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高慧 路新枝 于文功 中国海洋大学医药学院;
【摘要】目的:构建金黄色葡萄球菌一氧化氮合酶基因(nos)缺失突变株。方法从金黄色葡萄球菌RN6390的基因组DNA中扩增了nos基因的上、下游片段;以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌穿梭质粒pMAD(含有温度敏感性的复制起点,红霉素抗性基因(erm)和β-半乳糖苷酶基因(bgaB)为筛选标记)为骨架,构建基于nos基因位点的同源重组载体pMAD△nos,该载体经金黄色葡萄球菌RN4220修饰后再转入金黄色葡萄球菌RN6390。经过在30℃和42℃交替培养,通过抗生素抗性和β-半乳糖苷酶活性筛选nos基因缺失突变株。结果筛选得到的突变菌株,经基因组PCR、定量PCR及序列分析表明,金黄色葡萄球菌RN6390基因组中的nos基因被成功地敲除。结论利用同源重组的方法构建了金黄色葡萄球菌RN6390nos缺失突变株,为金黄色葡萄球菌nos基因功能的研究奠定了基础。
【关键词】 金黄色葡萄球菌 一氧化氮合酶 同源重组
【基金】国家863计划(2007AA09C418)
【分类号】R378.11
前言金黄色葡萄球菌是最重要的人类病原体之一,它能够感染人类表皮、软组织、黏膜、骨和关节,尤其在医院环境中,金黄色葡萄球菌往往能抵御消毒剂的杀伤作用,造成创口感染,严重时会致人死亡。1997年ChoiW S等从金黄色葡萄球菌超声破碎液中分离纯化得到了一氧化氮合酶(N O S),
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摘要 目的：构建金黄色葡萄球菌一氧化氮合酶基因(nos)缺失突变株。方法从金黄色葡萄球菌RN6390的基因组DNA中扩增了nos基因的上、下游片段；以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌穿梭质粒pMAD(含有温度敏感性的复制起点，红霉素抗性基因(erm)和β-半乳糖苷酶基因(bgaB)为筛选标记)为骨架，构建基于nos基因位点的同源重组载体pMAD△nos，该载体经金黄色葡萄球菌RN4220修饰后再转入金黄色葡萄球菌RN6390。经过在30℃和42℃交替培养，通过抗生素抗性和β-半乳糖苷酶活性筛选nos基因缺失突变株。结果筛选得到的突变菌株，经基因组PCR、定量PCR及序列分析表明，金黄色葡萄球菌RN6390基因组中的nos基因被成功地敲除。结论利用同源重组的方法构建了金黄色葡萄球菌RN6390 nos缺失突变株，为金黄色葡萄球菌nos基因功能的研究奠定了基础。
关键词：金黄色葡萄球菌；一氧化氮合酶；同源重组
中图分类号：R378.11 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)10-1845-04
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