犬瘟热病毒H基因原核表达载体的构建
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王亚君 华育平 东北林业大学野生动物资源学院;
【摘要】利用本实验以前构建的含有犬瘟热病毒H基因的pMD18-T质粒,根据pMD18-T-H序列设计带有XbalI和HindIII酶切位点的引物,对H基因进行PCR扩增,得到约1800bp左右的片段。该片段被克隆到pMD18-Tsimple载体上,用XbalI和HindIII进行单、双酶切鉴定,筛选阳性克隆。将阳性克隆再用XbalI和HindIII进行双酶切,纯化回收CDVH基因片段。将原核表达载体pPROEXTMHTa、pet-30b用同样的方法酶切,回收载体片段。将CDVH基因片段分别用T4连接酶连接到回收的pPROEXTMHTa、pet-30b载体上,构建原核表达载体质粒pPROEXTMHTa-H和pet-30b-H。再用XbalI和HindIII进行单、双酶切鉴定阳性载体。本实验为下一步H蛋白表达、纯化并作为CDV诊断用抗原及CD的免疫预防奠定了基础。
【关键词】 犬瘟热病毒 H基因 表达载体 构建
【基金】黑龙江省科技攻关项目(GB02B506) 国家林业局科技课题(野生动物主要疫病检测方法和诊断平台的建立)资助项目。
【分类号】Q78
前言犬瘟热(canine distem per,CD)是由犬瘟热病毒(CanineD istem perV irus,CD V)感染引起的一种急性、高度接触性传染病,该病广泛存在并流行于世界各地,严重地影响着养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护的发展,因此一直是犬病研究的热点之一[1-2]。伴随生态环境的改变、
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摘要：利用本实验以前构建的含有犬瘟热病毒H基因的pMD18-T质粒，根据pMD18-T-H序列设计带有Xba1 Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的引物，对H基因进行PCR扩增，得到约1800bp左右的片段。该片段被克隆到pMD18-Tsimple载体上，用xba1 Ⅰ和Hind Ⅲ进行单、双酶切鉴定，筛选阳性克隆。将阳性克隆再用xba1 Ⅰ和Hind Ⅲ进行双酶切，纯化回收CDVH基因片段。将原核表达载体pPROEXTMHTa、pet-30b用同样的方法酶切，回收载体片段。将CDV H基因片段分别用T4连接酶连接到回收的pPROEXTMHTa、pet-30b载体上，构建原核表达载体质粒pPROEXTMHTa-H和pet-30b-H。再用xba1 Ⅰ和Hind Ⅲ进行单、双酶切鉴定阳性载体。本实验为下一步H蛋白表达、纯化并作为CDV诊断用抗原及CD的免疫预防奠定了基础。
关键词：犬瘟热病毒；H基因；表达载体；构建
中图分类号：Q78，Q813 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)10-1849-03
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