共表达TCRα 12-2和TCRVβ 7.1重组腺病毒载体的构建及其杀伤肝癌细胞作用的研究
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摘要 目的：构建共表达TCRα 12-2和TCRVβ 7.1重组腺病毒载体Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1，并研究其杀伤肝癌细胞的作用。方法：提取外周血单核细胞(periphcral bloodmononuclear cell，PBMC)总RNA，用RT-PCR的方法得到TCRα 12-2基因。TCRVβ 7.1基因由pCDN3.1-Vβ7.1扩增获得，将这两个基因以IRES相连克隆入腺病毒穿梭质粒pDC315中。穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞，包装出可同时表达TCRα12-2和TCRVB7.1的重组腺病毒。然后提取病毒基因组DNA，对外源目的基因进行PCR鉴定；病毒感染宫颈癌细胞(HELA)，48小时后提取细胞总RNA，通过RT-PCR鉴定目的基因表达；最后病毒感染PBMC，用流式细胞仪检测目的蛋白的表达。对鉴定正确的病毒进行大量扩增并测定滴度。用MTT比色法检测Ad.TCRα 12-2-IRES-V87.1感染的PBMC对肝癌细胞HEPG2和BEL-7402的杀伤作用。结果：从重组病毒基因组中扩增出目的基因TCRα2-2和TCRVB7.1，RT-PCR和流式细胞仪检测表明目的基因可以有效的表达。Ad.TCRα02-2-IRES-VB7.1感染PBMC组对肿瘤细胞的杀伤率明显高于PBMC组和Ad-GFP感染组。结论：成功构建了双表达TCRα12-2和TCRVB7.1基因的重组腺病毒载体Ad.TCRα12-2-IRES-VB7.1，且其感染后的PBMC可有效的杀伤肝癌细胞。
关键词：TCR；重组腺病毒载体；TCRα12-2；TCRVB7.1；
中图分类号：Q784 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)11-2001-04
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