小鼠白细胞介素-33基因的克隆及序列分析
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李明才 柳晓金 郑晓璇 苏绍波 汕头大学医学院炎症与免疫性疾病研究所;
【摘要】目的:克隆小鼠IL-33基因全长编码区cDNA,并对其进行序列分析。方法:从BALB/c小鼠的脊髓组织中提取总RNA,逆转录为cDNA,用热启动PCR技术,扩增小鼠IL-33基因全长编码区cDNA,经双酶切后,克隆入pcDNA3.1(+)载体中,构建真核表达载体pcDNA3.1-mIL-33,然后进行酶切鉴定与序列分析。结果:小鼠IL-33基因的PCR产物和重组载体经凝胶电泳和酶切鉴定、测序分析证实,其序列与GenBank中数据一致。小鼠IL-33基因的全长编码序列为801 bp,编码266个氨基酸。结论:小鼠IL-33基因成功的克隆并构建了其真核表达载体,为进一步进行IL-33的表达与功能研究奠定了基础。
【关键词】 IL- 热启动PCR 基因克隆 小鼠
【基金】国家自然科学基金资助项目(30671932，30770840)
【分类号】R392
前言白细胞介素一33(interleukin一33，IL一33)最初是2005年由schmitz等“}用计算机序列分析、发现并鉴定的一种前炎症细胞因子。其后，IL一33也被描述为一种具有转录抑制特性的染色质相关的核因子「2〕。IL一33的基因序列和结构与IL一1家族成员IL一lp和IL一18的相似，它属于I
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摘要 目的：克隆小鼠IL-33基因全长编码区cDNA，并对其进行序列分析。方法：从BALB/c小鼠的脊髓组织中提取总RNA，逆转录为cDNA，用热启动PCR技术，扩增小鼠IL-33基因全长编码区cDNA，经双酶切后，克隆入pcDNA3.1(+)载体中，构建真核表达载体pcDNA3.1-mIL-33，然后进行酶切鉴定与序列分析。结果：小鼠IL-33基因的PCR产物和重组载体经凝胶电泳和酶切鉴定、测序分析证实，其序列与GenBank中数据一致。小鼠IL-33基因的全长编码序列为801 bp，编码266个氨基酸。结论：小鼠IL-33基因成功的克隆并构建了其真核表达载体，为进一步进行IL-33的表达与功能研究奠定了基础。
关键词：IL-33；热启动PCR；基因克隆；小鼠
中图分类号：R392，Q78 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)11-2032-02
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