大鼠p75NTR荧光真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达
 |
| 第1页 |
参见附件(2097KB，3页)。
王永堂 鲁秀敏 朱枫 曾琳 龙在云 伍亚民 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;重庆工学院化学与生物工程学院;
【摘要】目的:构建大鼠p75神经营养素受体(p75neurotrophin receptor,p75NTR)cDNA序列的绿色荧光真核表达载体并鉴定其在人胚肾293(human embryo kidney 293,HEK293)细胞中的表达。方法:采用PCR方法从含野生型大鼠p75NTR的pDC316-RP75质粒中扩增目的片段,经EcoRI和SalI双酶切,定向克隆于pEGFP-N1质粒中,构建绿色荧光真核表达载体pEGFP-N1-RP75,经酶切及测序鉴定后,通过脂质体转染HEK293细胞,激光共聚焦及免疫组织化学法鉴定大鼠p75NTR的表达。结果:重组质粒经酶切鉴定和序列分析证实含有大鼠p75NTR的编码序列,转染后经激光共聚焦显微镜及免疫组织化学染色观察表明重组质粒能够在HEK293细胞中表达出具有活性的大鼠p75NTR片段。结论:大鼠p75NTR绿色荧光真核表达载体构建成功并可在HEK293细胞中表达,为进一步研究奠定了基础。
【关键词】 p神经营养素受体 荧光 重组表达 HEK细胞
【基金】国家自然科学基金资助项目(No30600665) 第三军医大学青年科研基金资助项目(No06XG048) 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室开放课题基金资助项目(No2006A-3) 重庆市自然科学基金资助项目(NoCSTC,2008BB5107)
【分类号】R346
前言神经营养因子通过p75神经营养素受体(p75neurotrophin receptor,p75NTR)和酪氨酸激酶(tyrosine kinase,Trk)受体介导细胞的存活、分化、生长和凋亡[1-3]。p75NTR是一种低亲和性神经营养素受体,也是肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)受体超家族成员之一。由于其自
------
摘要 目的：构建大鼠p75神经营养素受体(p75 neurotrophin receptor，p75NTR)cDNA序列的绿色荧光真核表达载体并鉴定其在人胚肾293(human embryo kidney 293，HEK293)细胞中的表达。方法：采用PCR方法从含野生型大鼠p75NTR的pDC316-RP75质粒中扩增目的片段，经EcoRI和salI双酶切，定向克隆于pEGFP-N1质粒中，构建绿色荧光真核表达载体pEGFP-N1-RP75，经酶切及测序鉴定后，通过脂质体转染HEK293细胞，激光共聚焦及免疫组织化学法鉴定大鼠p75NTR的表达。结果：重组质粒经酶切鉴定和序列分析证实含有大鼠p75NTR的编码序列，转染后经激光共聚焦显微镜及免疫组织化学染色观察表明重组质粒能够在HEK293细胞中表达出具有活性的大鼠p75NTR片段。结论：大鼠p75NTR绿色荧光真核表达载体构建成功并可在HEK293细胞中表达，为进一步研究奠定了基础。
关键词：p75神经营养素受体；荧光；重组表达；HEK293细胞
中图分类号：R322.8，Q78，Q813 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)02-205-03
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2097KB，3页)。