人NDRG2基因截短体在pEGFP-C2真核表达载体中的表达和鉴定
Ndrg,PCR,真核表达载体pEGFP-C
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王健 吴琳 张健 刘学武 张璟 沈岚 刘新平 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室;
【摘要】目的:在pEGFP-C2真核表达载体中表达人NDRG2基因的截短部分并进行鉴定。方法:以含有人NDRG2基因的pGKBT7质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得截短的人NDRG2基因,然后克隆入表达载体pEGFP-C2;以荧光显微镜观察和WesternBlotting方法对表达产物进行鉴定。结果:表达产物中在分子量67kD左右可见与目的蛋白分子量相符的条带,该条带可被Ndrg2单克隆抗体特异性识别。结论:构建了截短的人NDRG2基因真核表达载体,并在真核细胞中(HEK-293)获得成功表达。
【关键词】 Ndrg 基因 PCR 真核表达载体pEGFP-C
【基金】国家自然科学基金资助项目(批准号:30600314)
【分类号】Q78
人NDRG2基因是本实验室于1999年通过消减杂交的方法从人全脑cDNA文库中鉴定出来的新基因[1],与NDRG1[2],NDRG3[3],NDRG4[4]共同构成人NDRG基因家族,此家族成员为一类新的分化相关基因[5],其中对NDRG1的研究较为深入,现有结果表明:人NDRG1基因参与了应激反应[6]、细胞增殖[7]
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摘要 目的：在pEGFP-C2真核表达载体中表达人NDRG2基因的截短部分并进行鉴定。方法：以含有人NDRG2基因的pGKBT7质粒为模板，通过PCR的方法扩增获得截短的人NDRG2基因，然后克隆人表达载体pEGFP-C2；以荧光显微镜观察和WesternBlotting方法对表达产物进行鉴定。结果：表达产物中在分子量67kD左右可见与目的蛋白分子量相符的条带，该条带可被Ndrg2单克隆抗体特异性识别。结论：构建了截短的人NDRG2基因真核表达载体，并在真核细胞中(HEK-293)获得成功表达。
关键词：Ndrg2；基因；PCR；真核表达载体pEGFP-C2
中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)04-631-03
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