噬菌体抗体库淘筛方法的比较研究
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杜东霞 吴剑 李小曼 朱振久 张冉 湖南师范大学医学院;湖南师范大学生命科学学院;
【摘要】目的:比较噬菌体抗体库的淘筛方法,从而为得到亲和力高、特异性强的抗体克隆打下基础。方法:在包被好抗原的2个细胞培养瓶中加入噬菌体抗体库,一个采用先直接加入宿主菌感染后,再将培养瓶内残留结合物洗脱中和后感染的方法,另一个则采用先洗脱并中和的噬菌体感染宿主菌,与抗原结合的剩余的噬菌体再行直接感染,将2种方法所得到的感染菌和援救所得的噬菌体进行CFU和PFU测定。结果:从实验的数据中可以发现,采用第一种方法所得次级库的容量要大于后一种方法所得的初级库。结论:噬菌体抗体库的淘筛方法必须按照实验的具体情况进行选择,如果要求严谨度适中,则可以采用直接感染的方法淘筛。
【关键词】 噬菌体抗体库 淘筛 CFU PFU 亲和力
【基金】湖南省自然科学基金资助项目(05JJ30065) 湖南省教育厅科研基金一般项目(06C504)
【分类号】R392
前言噬菌体抗体库技术目前已被广泛应用于生物学、医学等各个研究领域[1],通过基因工程和噬菌体展示技术的结合,能得到人源化的针对几乎所有抗原表位的抗体,比如针对各种细菌、病毒的抗体。由于抗体的基因完全来自于人体的B细胞和/或浆细胞,应用于人体时不会引起免疫应答,故
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摘要 目的：比较噬菌体抗体库的淘筛方法，从而为得到亲和力高、特异性强的抗体克隆打下基础。方法：在包被好抗原的2个细胞培养瓶中加入噬菌体抗体库，一个采用先直接加入宿主菌感染后，再将培养瓶内残留结合物洗脱中和后感染的方法，另一个则采用先洗脱并中和的噬菌体感染宿主菌，与抗原结合的剩余的噬菌体再行直接感染，将2种方法所得到的感染菌和援救所得的噬菌体进行CFU和PFU测定。结果：从实验的数据中可以发现，采用第一种方法所得次级库的容量要大于后一种方法所得的初级库。结论：噬菌体抗体库的淘筛方法必须按照实验的具体情况进行选择，如果要求严谨度适中，则可以采用直接感染的方法淘筛。
关键词：噬菌体抗体库；淘筛；CFU；PFU；亲和力
中图分类号：R364.5，Q514+.3 文献标识码：B 文章编号：1673-6273(2009)04-730-03
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