大鼠脊髓匀浆上清诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究
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吴金生 李鑫 王晓萃 付文玉 丁洁 魏德全 潍坊医学院附属医院;潍坊医学院生理学教研室;潍坊医学院人体解剖学教研室;潍坊医学院组织胚胎学教研室;
【摘要】目的:观察大鼠脊髓匀浆上清诱导骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)形成的神经元样细胞形态特征。方法:通过贴壁法培养分离大鼠骨髓MSCs,体外扩增纯化后加入正常大鼠脊髓匀浆上清诱导72h,倒置显微镜下观察诱导前后细胞的形态结构,激光共聚焦显微镜观测钙离子细胞形态和荧光强度变化,免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞的表型特征。结果:倒置显微镜下可见MSCs呈纺锤形和多角形,核居中,有1-2个核仁,诱导后细胞呈神经元样,细胞伸出较长的轴突样和树突样突起。免疫细胞化学法显示NSE(神经元特异性烯醇化酶)、NF(神经丝蛋白)阳性,GFAP(神经胶质细胞酸性蛋白)阴性。共聚焦显微镜扫描脊髓匀浆上清诱导前细胞形态呈细长的梭形,细胞核不明显,胞体染色强,突起染色弱,荧光像素值低;诱导后,细胞呈现神经元样形态,胞体大,有多个突起,胞体及各突起染色强,荧光像素值高。结论:大鼠脊髓匀浆上清液可在体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。
【关键词】 骨髓间充质干细胞 脊髓匀浆上清 细胞内游离钙离子 神经元
【基金】潍坊市科学技术局资助项目(200703035)
【分类号】Q813
前言骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是骨髓中有多向分化潜能的干细胞,具有取材方便、易于体外分离扩增等优点。MSCs特性稳定,连续传代培养和冷冻保存仍具有多向分化潜能。大量实验证明,MSCs不仅可分化为中胚层的骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞,而且能分化成外胚
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前言
骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是骨髓中有多向分化潜能的干细胞，具有取材方便、易于体外分离扩增等优点。MSCs特性稳定，连续传代培养和冷冻保存仍具有多向分化潜能。大量实验证明，MSCs不仅可分化为中胚层的骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞，而且能分化成外胚层的神经元、神经胶质细胞及内胚层的肝细胞。MSCs在脑组织中可以存活并能够改善神经损伤症状。因此，研究MSCs向神经细胞的分化为神经退行性疾病、脑血管疾病等神经系统疾病的治疗带来新的希望。为了更好地了解在诱导剂作用下诱导形成神经元样细胞的特性，以利对其的进一步研究和应用。本实验用大鼠脊髓匀浆上清液对MSCs进行体外诱导分化，以探讨MSCs在体内分化的可能因素。
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