针对核因子-κB P65基因的短发夹干扰RNA逆转录病毒载体构建与鉴定

http://www.100md.com 2009年4月15日 吴春婷　赵佳晖　闫树凤　靳丽妍　朱光发

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     摘要 目的：构建针对人核因子κB亚基P65基因mRNA的短发夹干扰RNA(shRNA)逆转录病毒表达载体，并探讨小干扰RNA(siRNA)靶向抑制NF-κBP65基因表达的作用。方法：根据shRNA设计原则，在人NF-κBP65全长序列中选取含19个核苷酸靶序列，设计形成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pSUPER.retro.neo中，构建针对NF-κB P65基因的shRNA表达载体。经293A细胞包装，并感染NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后，感染THP-1细胞。分别采用RT-PCR和Westem blot从mRNA和蛋白水平检测干扰效果。结果：限制性酶切和基因测序证实针对人NF-κB P65亚基的shRNA表达逆转录病毒载体成功构建；其感染THP-1细胞后。NF-κBP65的mRNA和蛋白表达明显抑制。结论：成功构建了NF-κB P65 shRNA逆转录病毒表达载体，该载体能高效感染THP-1并明显抑制NF-κB P65的表达。

    关键词：RNA干扰；短发夹RNA；逆转录病毒；核因子-κB

    中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1673—6273(2009)08—1462—03

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