乙肝e抗原在大肠杆菌中的高效表达和优化
乙型肝炎病毒,乙型肝炎病毒e抗原,融合表达,正交试验
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周倩 何小维 彭运平 刘晓云 王海龙 华南理工大学轻工与食品学院;广州万孚生物技术有限公司;
【摘要】目的:探讨乙型肝炎病毒e抗原基因在大肠杆菌中进行高效融合表达,并对表达条件进行优化和影响因素的分析。方法:从乙肝患者阳性血清中提取DNA,设计引物扩增目的基因,按常规方法克隆入pET-GST载体谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因的下游,获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导目的基因片段的表达,经超声处理后SDS-PAGE电泳。对表达条件进行正交试验优化,并分析其影响因素的大小。结果:HBeAg以包涵体形式表达出来,其表达的GST融合蛋白的分子质量大约为44KD。最佳的表达条件为温度为30℃,IPTG浓度为0.6mmol/L,诱导时间为2h。其影响因素大小依次为诱导温度诱导时间IPTG浓度。结论:乙肝e抗原基因在大肠杆菌中获得了高效表达。
【关键词】 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒e抗原 融合表达 正交试验
【基金】广东省部产学研结合项目(2006D90504011) 广东省科技攻关项目(2006B40101013)
【分类号】R512.62
前言全世界约有20亿人感染了乙型肝炎病毒,约有3.5亿人患有慢性感染[1-2]。估计每年有60万人死于急性或慢性乙型肝炎[3-4]。HBeAg是C基因编码的核壳蛋白的分泌型,是preC蛋白翻译后加工的产物。HBeAg的前体是带有完整preC序列,分子量为25KD的蛋白质(P25e蛋白)。自C区(第二个)AT
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摘要目的：探讨乙型肝炎病毒e抗原基因在大肠杆菌中进行高效融合表达，并对表达条件进行优化和影响因素的分析。
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