斑马鱼干扰素γ的克隆表达研究
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高昌 齐晓伟 穆苑 张长勇 祝梅香 王天奇 付淑霞 孙德明 北京协和医学院研究生院;国家人口计生委科学技术研究所实验动物中心;
【摘要】目的:通过人工诱导斑马鱼干扰素的产生,证实两种斑马鱼干扰素γ基因ifng1-1和ifng1-2的存在,并克隆这两种干扰素基因,构建高效表达载体并做原核表达。方法:通过conA药浴,诱导斑马鱼干扰素γ的表达,即刻提取组织总RNA,并通过RT-PCR方法扩增两种干扰素γ基因。将目的基因连入表达载体pET24a,构建重组载体pET24a-ifng1-1和pET24a-ifng1-2。将载体转化BL21,并用IPTG诱导融合蛋白的表达。产物经SDS-PAGE检测,分析蛋白表达情况。结果:成功克隆了两种斑马鱼干扰素γ基因,构建了pET24a-ifng1-1和pET24a-ifng1-2重组载体,并实现了原核融合表达。结论:两种干扰素γ基因都能够被conA所诱生,且具有相似特性,表明两种干扰素γ都不是假基因,都有可能在免疫系统中发挥作用,本实验为进一步研究两种干扰素γ的功能奠定了基础。
【关键词】 斑马鱼 干扰素γ 原核表达
【基金】北京市应用基础研究与战略高技术课题(20092020)
【分类号】Q78
前言干扰素(IFN)是一类能够诱导脊椎动物细胞进入抗病毒状态的分泌型细胞因子,根据基因、蛋白结构及功能性质的不同,主要分为IFN I和IFN II两个家族[1]。其中IFN I家族包括IF-Nα,IFNβ等多种干扰素,每种干扰素又包括许多亚型。IFN II家族只有IFNβ一种[2],在所有的高等脊椎
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摘要目的：通过人工诱导斑马鱼干扰素的产生，证实两种斑马鱼干扰素γ基因ifng1-1和ifng1-2的存在，并克隆这两种干扰素基因，构建高效表达载体并做原核表达。方法：通过conA药浴，诱导斑马鱼干扰素γ的表达，即刻提取组织总RNA，并通过RT-PCR方法扩增两种干扰素γ基因。将目的基因连入表达载体pET24a，构建重组载体pET24a-ifng1-1和pET24a-ifng1-2。将载体转化BL21，并用IPTG诱导融合蛋白的表达。产物经SDS-PAGE检测，分析蛋白表达情况。结果：成功克隆了两种宽马鱼干扰素γ基因，构建了pET24a-ifng1-1和pET24a-ifng1-2重组载体，并实现了原核融合表达。结论：两种干扰素γ基因都能够被conA所诱生，且具有相似特性，表明两种干扰素γ都不是假基因，都有可能在免疫系统中发挥作用，本实验为进一步研究两种干扰素γ的功能奠定了基础。
关键字：斑马鱼；干扰素γ；原核表达
中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)13-2421-03
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