Survivin反义寡核苷酸诱导SW620细胞凋亡过程中对caspase-3表达的影响
survivin,人结肠癌SW细胞,半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-
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靳秋月 张东昌 史娜 谢红 陈立军 武警医学院基础部生化教研室;武警医学院附属医院肿瘤外科;
【摘要】目的:观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌细胞株SW620增殖、凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计、合成反义寡核苷酸并通过脂质体将其转染至人结肠癌细胞SW620中。噻唑蓝(MTT)法观察survivin ASODN对SW620细胞增殖的抑制作用,测定IC50;转染36h后,Hoechst33342染色荧光显微镜下观察检测SW620细胞核变化,RT-PCR检测survivin ASODN处理后SW620细胞中caspase-3mRNA表达,分光光度法检测caspase-3酶活性。结果:转染8h后,SW620细胞中可见黄绿色荧光均匀分布。不同浓度survivin ASODN处理SW620细胞44h后,SW620细胞增殖显著受到抑制,IC50为1×10-6M。2×10-7,4×10-7,6×10-7,8×10-7and1.2×10-6M的survivin ASODN处理后,细胞生长抑制率分别为15.38±0.022%、24.04±0.023%、30.87±0.027%、45.02±0.018%和65.01±0.024%。Hoechest33342染色后荧光显微镜下可观察到染色质凝集并出现凋亡小体,RT-PCR检测到caspase-3mRNA表达上调,另外caspase-3酶活性显著升高。结论靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计合成的survivin ASODN可抑制显著结肠癌SW620增殖、诱导细胞凋亡,其机制与诱导caspase-3表达,提高caspase-3酶活性有关。
【关键词】 survivin 反义寡核苷酸 人结肠癌SW细胞 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-
【分类号】R735.35
前言Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,I-AP)家族的成员之一,由142个氨基酸组成,分子量为16.5kD的蛋白质。它表达于胚胎和发育的胎儿组织,在正常成人已分化的组织(胸腺、子宫内膜等少数组织除外)不表达,而在多种肿瘤组织中呈周期依赖性的表达[1-3]。这
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摘要目的：观察Survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌细胞株SW620增殖、凋亡的影响，并初步探讨其分子机制。方法：靶向Survivin基因中与caspase-3结合的部位设计、合成反义寡核苷酸并通过脂质体将其转染至人结肠癌细胞SW620中。噻唑蓝(MTT)法观察Survivin ASODN对SW620细胞增殖的抑制作用，测定IC50；转染36h后，Hoechst33342染色荧光显微镜下观察检测SW620细胞核变化，RT-PcR检测Survivin AsODN处理后SW620细胞中caspasc-3 mRNA表达，分光光度法检测Caspase-3酶活性。结果：转染8h后，SW620细胞中可见黄绿色荧光均匀分布。不同浓度survivin ASODN处理SW620细胞44h后，SW620细胞增殖显著受到抑制，IC50为1×106M。2×10-7，4×10-7，6×10-7，8×10-7and1.2×10-6M的survivin ASODN处理后，细胞生长抑制率分别为15.38±0.022%、24.04±0.023%、30.87±0.027%、45.02±0.018%和65.01±0.024%。Hoechest33342染色后荧光显微镜下可观察到染色质凝集并出现凋亡小体，RT-PCR检测到caspase-3mRNA表达上调，另外caspase-3酶活性显著升高。结论靶向survivin基因中与caspase-3结合的部位设计合成的survivin ASODN可抑制显著结肠癌SW620增殖、诱导细胞调亡，其机制与诱导caspase-3表达，提高caspasc-3酶活性有关，关键词：survivin；反义寡核苷酸；人结肠癌SW620细胞；细胞凋亡；半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3
中图分类号：R735.3+5 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)16-3060-05
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