DADS诱导HL-60 G2/M期阻滞消减文库的构建与初步筛选
二烯丙基二硫,抑制消减杂交,表达序列标签,G,M期阻滞
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汪煜华 曾永智 张晓红 罗红梅 唐圣松 南华大学药物药理研究所;
【摘要】目的:构建DADS诱导HL60-细胞G2/M期阻滞的差异表达文库,初步筛选相关基因。方法:分别提取无DADS和有DADS处理HL-60细胞的总RNA和mRNA,构建消减cDNA文库。随即挑选正向SSH的阳性克隆,PCR检测插入片段,将含插入片段的克隆测序。Blastn分析差异cDNA片段的同源性。结果:构建了DADS诱导人白血病HL-60细胞G2/M期阻滞差异表达文库,其中包含120个正向SSH的克隆和100个反向SSH的克隆。50个随机正向SSH的克隆测序、比较同源性,发现5个新EST片段,已经在GenBank中登录。结论:所构建的DADS诱导人白血病HL-60细胞G2/M期阻滞消减文库为进一步筛选白血病HL-60细胞G2/M期阻滞相关基因奠定了基础。
【关键词】 二烯丙基二硫 G/M期阻滞 抑制消减杂交 消减文库 表达序列标签
【基金】湖南省自然科学基金重点项目(04JJY2006) 湖南省高等学校科学研究项目(07C621)
【分类号】Q75
前言二烯丙基二硫(Diallyl Disulfide,DADS)是大蒜中分离提取的单体有机硫化物,现有研究表明DADS具有良好的防癌、抗癌作用[1-4]。新近我们的研究表明,DADS通过非p53途径激活p38MAPK,增强Cdc25和Cdc2激酶的磷酸化水平,诱导HL-60细胞G2/M期检测点化[5]。同时,我们发现DADS又到H
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前言
二烯丙基二硫(Diallyl Disulfide，DADS)是大蒜中分离提取的单体有机硫化物，现有研究表明DADS具有良好的防癌、抗癌作用。新近我们的研究表明，DADS通过非p53途径激活p38MAPK，增强Cdc25和Cdc2激酶的磷酸化水平，诱导HL-60细胞G2/M期检测点化t5，同时，我们发现DADS又到HL-60细胞G2/M期阻滞与eyelinBl和p21胞质的定位有关。细胞周期阻滞及其维持涉及多步骤、多阶段，对于参与细胞周期G2/M检查点启动的相关基因还知之甚少。本研究利用抑制消减杂交技术构建DADS诱导HL-60细胞G2/M期阻滞消减文库，并进行初步筛选。
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