携带Bclxl基因的重组腺相关病毒的制备和鉴定
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李工博 彭炬 卢光琇 中南大学生殖与干细胞工程研究所 人类干细胞国家工程研究中心;
【摘要】目的:制备携带Bclxl基因的重组腺相关病毒,并鉴定其感染细胞有效性。方法:抽提BALB/c小鼠脾脏总RNA,通过RT-PCR获得cDNA,然后设计引物通过PCR获得Bclxl基因的编码序列。将得到的Bclxl编码序列插入腺相关病毒质粒pAAV-MCS中的多克隆位点,从而构建出重组腺相关病毒质粒pAAV-Bclxl。将质粒转染细胞后使用Western Blot和流式分析检测Bclxl蛋白的表达。进一步包装制备了携带Bclxl基因的重组腺相关病毒颗粒,用其感染HT1080细胞后用流式细胞仪分析了感染前后细胞中Bclxl基因的表达情况。结果:质粒转染后细胞中Bclxl蛋白的表达水平显著高于转染前,病毒感染后细胞中Bclxl蛋白的表达水平显著高于感染前。结论:携带Bclxl基因的重组腺相关病毒颗粒包装成功,能高效感染细胞,为后续的遗传改造树突细胞打下了基础。
【关键词】 Bclxl基因 重组腺相关病毒 树突细胞
【基金】国家863课题(2006AA02A102) 国家973课题(2007CB948103和2007CB947901)
【分类号】Q78
前言Bclxl是一种已知的抗凋亡基因,属于Bcl2家族。Bclxl在线粒体膜上表达,其抗凋亡的机制是拮抗bax和bak诱发的caspase介导的凋亡[1]。研究表明Bclxl能抑制多种细胞的凋亡[2,3],并对造血和免疫细胞的存活发挥重要的调节作用[4,5]。树突细胞是迄今发现的免疫系统中最强大的抗
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前言
Bclxl是一种已知的抗凋亡基因，属于Bcl2家族。Bclxl在线粒体膜上表达，其抗凋亡的机制是拮抗bax和bak诱发的caspasc介导的凋亡”。
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