昆明小鼠胚胎干细胞滋养层制备条件的实验研究
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黄林 莫曾南 覃敏 广西医科大学第一附属医院泌尿外科 广西医科大学泌尿科学研究所;
【摘要】目的:建立小鼠胚胎成纤维细胞(MEFS)滋养层,用于昆明小鼠胚胎干细胞的培养。方法:取妊娠13.5的胎鼠,采用组织消化法分离培养出原代成纤维细胞,对MEFs的生长形态、生长曲线及分裂指数进行观察;MTT法筛选丝裂霉素C(MMC)作用的最佳浓度和时间;取妊娠3.5d的囊胚在经MMC处理的饲养层上培养,观察胚胎干细胞集落生成情况。结果:MEFS为一种贴壁生长且增殖速度较快的细胞,第三代细胞增殖旺盛,第5代以后细胞开始变形并趋于衰老;MMC能抑制胚胎成纤维细胞的增殖,最佳的作用浓度和时间是10ug/ml作用2.5～4h,20ug/ml作用1-2.5h。妊娠3.5d小鼠囊胚在饲养层上培养能形成典型的"鸟巢"状干细胞集落,并可维持胚胎干细胞的正常形态且不发生分化。结论:这种方法制备的滋养细胞层适用于胚胎干细胞的培养。
【关键词】 胚胎成纤维细胞 胚胎干细胞 滋养层
【基金】广西壮族自治区研究生科研创新项目(2009105981002M197) 广西科学研究与技术开发计划课题(桂科攻0779002,桂科攻0322025-20)
【分类号】Q813
前言良好的饲养层细胞是胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)培养过程中维持细胞的未分化和无限增殖状态的关键因素。目前,虽然已经建立了ESCs的无饲养层培养体系[1,2],但大多数ES细胞的分离培养在饲养层上更易完成[3,4]。因此,进行ES细胞的建系和后续研究需要有效而成熟
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前言
良好的饲养层细胞是胚胎干细胞(Embryonic stem cells， ESCs)培养过程中维持细胞的未分化和无限增殖状态的关键因素。目前，虽然已经建立了ESCs的无饲养层培养体系，但大多数ES细胞的分离培养在饲养层上更易完成。因此，进行ES细胞的建系和后续研究需要有效而成熟的饲养层培养体系支持。目前在国内，经典的ESCs分离培养体系所用饲养层细胞仍为小鼠胚胎成纤维细(mouse embryonic fibroblast cells MEFs)，MEFs细胞来源丰富、取材方便、分泌力强而成为ESCs首选的饲养层细胞。所以优化MEFs饲养层制备条件是分离培养ESCs的关键环节。本实验以昆明系小鼠为实验材料，对MEFs的分离，培养和MMC的最佳作用时间和浓度等相关因素和方法进行探讨，旨在建立稳定的MEFs培养体系，以期为进一步开展ESCs的研究提供理论依据和实验基础。
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