小鼠Dppa2基因shRNA载体的构建及干扰效果的检测
RNA干扰(RNAinterference,RNAi)
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陈天姬 杜娟 卢光琇 中南大学生殖与干细胞工程研究所;
【摘要】目的:构建有效的针对小鼠Dppa2基因的shRNA(short hairpin RNA)干扰载体。方法:设计合成2对针对小鼠Dppa2基因的shRNA序列以及1对与哺乳动物基因组无同源性的shRNA序列作为对照,构建pSUPER.Retro.puro干扰载体并进行PCR,酶切和测序验证。进一步将各干扰载体分别转染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs),RT-PCR检测干扰效率。结果:PCR,酶切和测序验证均表明各shRNA载体构建成功。将空载体及各重组载体分别转染小鼠ESCs发现,干扰组Dppa2基因表达水平相对于空载体对照组和阴性shRNA载体对照组明显下调。结论:成功构建了有效的针对小鼠Dppa2基因的shRNA干扰载体,为进一步研究Dppa2基因在维持小鼠ESCs不分化过程中的作用提供了基础。
【关键词】 Dppa RNA干扰(RNAinterference RNAi) shRNA载体
【基金】国家自然科学基金资助项目(30570937) 中南大学研究生创新基金资助项目(2340-74334000003)
【分类号】Q78
前言RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年发展起来的一项技术[1]。利用RNAi可以特异且有效地沉默目的基因。通过研究将目的基因沉默后对细胞或个体发育的影响,可以获得目的基因功能的相关信息。因此RNAi技术被广泛用于基因功能研究。DPPA2(人)/Dppa2(小鼠)(Developmental Pl
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前言
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是近年发展起来的一项技术。利用RNAi可以特异且有效地沉默目的基因。通过研究将目的基因沉默后对细胞或个体发育的影响，可以获得目的基因功能的相关信息。因此RNAi技术被广泛用于基因功能研究。DPPA2(人)/Dppa2(小鼠)(Developmental Pluripotency-Associated gene 2)是近年来发现的在胚胎干细胞(embryonic stem ceils，ESCs)等多能性细胞中特异表达的基因，一些研究将DPPA2/Dppa2基因视为一个多能性的标志基因。DPPA2/Dppa2基因被认为在维持ESCs不分化的过程中发挥一定的作用。然而目前关于该基因的功能并不十分清楚。利用RNAi技术特异沉默小鼠ESCs中Dppa2基因的表达，将有助于我们了解Dppa2基因在维持ESCs不分化过程中的作用。
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