SPARC基因敲除小鼠的繁育及子代基因型的鉴定
富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白,基因型鉴定
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罗盘 罗振 赵秀华 肖娜 程腊梅 中南大学生殖与干细胞工程研究所;人类干细胞国家工程研究中心;
【摘要】目的:探讨富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白(SPARC)基因敲除小鼠的繁殖和鉴定方法,为进一步研究SPARC蛋白的功能奠定基础。方法:将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型。提取子鼠鼠尾基因组DNA,用PCR法扩增SPARC和Neo基因片段,通过限制性内切酶酶切反应,证实PCR扩增产物的正确性;应用Westernblot检测SPARC蛋白质的表达,进一步证实PCR鉴定方法的可靠性。结果:SPARC基因杂合子小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,SPARC基因缺失纯合子小鼠有繁殖能力。琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR产物分子量大小与预期的目的基因片段相对分子质量大小一致,酶切和Westernblot结果证实PCR结果可靠。结论:PCR方法能够准确鉴定SPARC基因突变小鼠基因型。
【关键词】 富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白 基因敲除 基因型鉴定
【基金】国家自然科学基金项目(30771053) 中南大学研究生创新基金(2009ssxt103)
【分类号】Q95-3
前言SPARC(secreted protein,acidic and rich in cysteine),又称为骨连接素、BM40,是一个43kDa的细胞外基质糖蛋白。SPARC通过调节细胞增殖、分化、迁移、细胞与细胞外基质的相互作用等,参与机体的多种生理和病理过程[1,2]。在成体组织,SPARC主要表达在成骨细胞、内皮细胞、
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前言
SPARC(secreted protein，acidic and rich in cysteine)，又称为骨连接素、BM40，是一个43 kDa的细胞外基质糖蛋白。SPARC通过调节细胞增殖、分化、迁移、细胞与细胞外基质的相互作用等，参与机体的多种生理和病理过程。在成体组织，SPARC主要表达在成骨细胞、内皮细胞、肠上皮、睾丸的足细胞、毛囊及晶体上皮细胞。研究表明：成骨细胞、内皮细胞是造血干细胞(HSC)的壁龛细胞；足细胞是精原干细胞的壁龛细胞；肠上皮干细胞位于肠上皮细胞形成的隐窝内(壁龛)；表皮干细胞的壁龛位于毛囊的上部。这些对干细胞的命运起了决定性作用的壁龛细胞/壁龛均高水平表达SPARC。此外，体外研究发现，SPARC抑制间充质干细胞向脂肪细胞分化，SPARC缺失鼠脂肪组织明显增多。因此，SPARC可能对包括造血干细胞(HSC)在内的多种干细胞的自我更新、增殖分化起重要的调节作用。
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