Netrin-1慢病毒表达载体的构建及鉴定
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陈景祥 王国华 任小宝 屈纪富 孙溦 第三军医大学西南医院急诊科;解放军第154医院内三科;
【摘要】目的:构建携带有Netrin-1基因的逆转录病毒载体,为研究Netrin-1在神经发育中的作用奠定基础。方法:PCR扩增Netrin-1基因片段后,将其克隆入慢病毒表达载体pLXSN;通过PCR、酶切、测序鉴定重组质粒。重组质粒转染PA317包装细胞后获得包装的病毒颗粒。病毒颗粒感染人脑胶质瘤细胞SW038-C2,经Western blot证明重组病毒在真核细胞内表达Netrin-1的情况。结果:经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pLX-NT。Western blot证明在感染细胞泳道有一特异性条带。结论:成功构建了能表达Netrin-1的慢病毒载体。
【关键词】 Netrin- 慢病毒载体 神经发育
【基金】重庆市自然科学基金计划项目(CSTC,2007BB5040)
【分类号】Q78
前言脊髓损伤临床上治疗难度大,效果不甚理想。影响损伤脊髓功能修复的原因主要有破坏的神经细胞再生能力不足和轴突生长缓慢;损伤后的微环境,局部血管新生缓慢致血供不良、神经营养因子不足等,不利于轴突再生[1]。在神经修复过程中,轴突导向因子在其中起了至关重要的作用[2]
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摘要 目的：构建携带有Netrin-1基因的逆转录病毒载体，为研究Netrin-l在神经发育中的作用奠定基础。方法：PCR扩增Netrin—l基因片段后，将其克隆入慢病毒表达栽体pLXSN；通过PCR、酶切、测序鉴定重组质粒。重组质粒转染PA317包装细胞后获得包装的病毒颗粒。病毒颗粒感染人脑胶质瘤细胞SWO38-c2，经Westernblot证明重组病毒在真核细胞内表达Netrin-1的情况。结果：经PCR扩增、酶切和测序验证，重组质粒构建正确，命名为pLX-NT。Westernblot证明在感染细胞泳道有一特异性条带。结论：成功构建了能表达Netrin-1的慢病毒载体。
关键词：Netrin-1；慢病毒载体；神经发育
中图分类号：Q75，Q78，R651.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2010)04-630-03
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