大鼠大脑皮质神经元原代培养不同培养体系及纯化方法的比较研究
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张玮 唐卉凌 王筠 李卫红 侯金才 曹进 李澎涛 北京中医药大学;清华大学;
【摘要】目的:比较两种大鼠大脑皮质神经元的培养及纯化方法不同组合的优劣,探讨科学可靠的神经元培养纯化方法。方法:采用DMEM/F12+血清的有血清培养体系和神经基础培养基(Neurobasal)+B27的无血清培养体系培养原代神经元。在接种3天后分别采用加入阿糖胞苷和5-氟脱氧尿嘧啶两种方法进行神经元的纯化。在1天、3天、7天采用形态学及7天时免疫荧光化学法鉴定神经元的纯度及生长状态。结果:1天、3天时,有血清培养体系和无血清体系中的神经元的形态结构和密度无明显差别,在分别加入阿糖胞苷和5-氟脱氧尿嘧啶后,7天时无血清体系中加阿糖胞苷组细胞密度明显低于其他三组细胞密度。通过免疫荧光化学法鉴定可见无血清体系中的神经元纯度明显高于有血清体系。结论:有血清体系的神经元纯度较差,阿糖胞苷和5-氟脱氧尿嘧啶不能显著抑制胶质细胞等杂细胞的生长。无血清培养体系加阿糖胞苷的神经元细胞受损较多,无血清培养体系加5-氟脱氧尿嘧啶纯化培养的大鼠大脑皮质神经元,纯度较高,细胞数量合适,是体外研究神经系统相关理论的良好模型。
【关键词】 神经元 阿糖胞苷 -氟脱氧尿嘧啶
【基金】国家重点基础发展规划项目(973项目)(2005CB523311)
【分类号】Q813
前言神经元原代培养是研究神经元形态结构及缺氧、缺血、中毒、外伤等病理因素影响的重要方法之一,以往多用胎鼠进行神经细胞培养[1],但由于胎鼠的胎龄不易掌握,而且胎脑的体积亦较小获得神经元的数量少,因此近年来用新生鼠代替胎鼠进行神经元原代培养的实验日渐增多。在培养
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前言
神经元原代培养是研究神经元形态结构及缺氧、缺血、中毒、外伤等病理因素影响的重要方法之一.以往多用胎鼠进行神经细胞培养，但由于胎鼠的胎龄不易掌握，而且胎脑的体积亦较小获得神经元的数量少，因此近年来用新生鼠代替胎鼠进行神经元原代培养的实验日渐增多。在培养过程中，获得活性的单细胞悬液和确定合适的培养体系在神经元培养中是最重要的步骤。培养体系概分为两类，一种是DMeM/F12+胎牛血清的培养体系，另一种是Ncurobasal+B27的无血清培养体系。神经元接种后还需进行纯化，纯化的方法也分为加阿糖胞苷和5-氟脱氧尿嘧啶两种方法。本研究拟对两种培养方法及纯化方法进行比较，以寻求一种理想的原代神经元培养方法。
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