一种大量快速分离脐带间充质干细胞的新方法
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祝加学 沈尊理 秦金保 张涛 孙恒赟 金羽青 周广东 上海交通大学附属第一人民医院整形外科;上海交通大学医学院附属第九人民医院妇产科;上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科;
【摘要】目的:探讨体外快速大量分离脐带间充质干细胞的新方法。方法:采用复合胶原NB4、dispaseII、透明质酸酶三种酶消化3h,加入PBSA溶液稀释,离心获得脐带间充质干细胞,培养;用流式细胞仪对P3代细胞进行表面标记的鉴定,用化学诱导的方法使第3代细胞向脂肪、骨、软骨细胞分化,2~4周后,分别行oilred、Safranin'O和茜素红染色,倒置显微镜下观察诱导结果。结果:经3种酶消化和PBSA稀释,短时间内从脐带中获得了大量间充质干细胞;伴随着细胞的传代,形态逐渐均一,传至第3代,细胞的形态已基本相似;流式细胞仪鉴定,细胞强表达间充质细胞的特异性标记CD90,CD73,CD105,而不表达造血系或内皮系细胞的标记CD45、CD14、CD11、CD34、CD19,也不表达主要组织相容性抗原HLA-DR;向脂肪细胞诱导后第4周,oilred染色见细胞内大量红染的脂滴;向软骨细胞诱导后第4周,Safranin'O染色见多数切片呈阳性,细胞团块中存在大量软骨特异性的陷窝样结构;向骨细胞诱导后第4周,茜素红染色发现肉眼可见的广泛散在的红色阳性钙结节。结论:本研究所采用的3种酶消化结合PBSA稀释的方法可以快速获得脐带间充质干细胞;
【关键词】 脐带间充质干细胞 三种酶消化法 多向分化
【基金】国家自然科学基金资助项目(30872630)
【分类号】R329
种子细胞是组织工程器官的重要组成部分,是目前制约组织工程发展的主要瓶颈。以前多以成体细胞作为组织工程器官的种子细胞,但是成体细胞是终末分化的细胞,体外增殖能力差,且来源受限,因此难以满足构建组织工程器官的需要;干细胞具有强大的增殖分化潜能,可以诱导分化为各类成
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种子细胞是组织工程器官的重要组成部分，是目前制约组织丁程发展的主要瓶颈。以前多以成体细胞作为组织工程器官的种子细胞，但是成体细胞是终末分化的细胞，体外增殖能力差，且来源受限，因此难以满足构建组织工程器官的需要；干细胞具有强大的增殖分化潜能，可以诱导分化为各类成体细胞满足构建的所需。干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞；胚胎千细胞作为全能干细胞拥有其它细胞无法比拟的增殖分化潜能，可以诱导分化为各类成体细胞，满足构建构建各类组织工程器官的需要，但是胚胎干细胞存在干细胞残留，植人体内后易形成畸胎瘤，且其来源包有较大的伦理争议，所以其研究及应用都受到限制；成体干细胞存在于成体的各类组织中，骨髓、脂肪、毛囊、皮肤等都有分离出间充质干细胞的报道；但是成体干细胞的获得会给患者带来新的创伤，且随着患者年龄的增大，其增殖分化潜能都会不断下降，对其将来的临床应用带来闲难；最近研究发现，脐带间充质中含有大量间充质干细胞，其增殖分化潜能介于胚胎干细胞和成体干细胞之间，有望成为组织工程器官种子细胞的新来源。
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