人IL-12重组逆转录病毒载体在HeLa细胞中的表达
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张巨峰 陈艳娜 张文峰 王俊伟 牟艳芳 黄树林 广东药学院生命科学与生物制药学院;深圳北京大学香港科技大学医学中心生物医学研究所;
【摘要】目的:包装携带人白细胞介素12(IL-12)的逆转录病毒,用于宫颈癌的治疗研究。方法:携带IL-12的逆转录病毒重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装,G418筛选,在NIH3T3细胞进行病毒滴度测定。然后用病毒感染人宫颈癌细胞HeLa。PCR、RT-PCR方法检测IL-12基因在HeLa中的整合和表达情况。结果:重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装后收获病毒上清,感染HeLa细胞,检测发现IL-12基因整合到细胞基因组DNA中,并且能有效的转录。结论:成功包装了携带IL-12基因的逆转录病毒,该病毒能有效感染HeLa细胞,并使携带的基因IL-12在细胞中表达,为今后IL-12基因治疗宫颈癌的研究奠定基础。
【关键词】 IL-基因 逆转录病毒 宫颈癌
【基金】中国博士后科学基金(20080440778) 广东药学院博士启动基金(43555023)
【分类号】R73-3
前言IL-12主要由活化的单核巨噬细胞和B淋巴细胞产生,是一个异二聚体蛋白,由两条分别为40KD(P40)和35KD(P35)的肽链经二硫键共价连接而成。IL-12能增加活化的自然杀伤细胞(NK细胞)和毒性T细胞数量,刺激T细胞和NK细胞产生细胞因子和提高淋巴因子激活的杀伤细胞的活性[1-3]。在
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摘要 目的：包装携带人白细胞介素12(IL-12)的逆转录病毒，用于官颈癌的治疗研究。方法：携带Ⅱ，12的逆转录病毒重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装，G418筛选，在Nm3T3细胞进行病毒滴度测定。然后用病毒感染人官颈癌细胞HeLa。PCR、RT-PCR方法检测IL-12基因在Hella中的整合和表达情况。结果：重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装后收获病毒上清，感染HeLa细胞，检测发现IL-12基因整合到细胞基因组DNA中，并且能有效的转录。结论：成功包装了携带IL-12基因的逆转录病毒，该病毒能有效感染HeLa细胞，并使携带的基因IL-12在细胞中表达，为今后IL-12基因治疗宫颈癌的研究奠定基础。
关键词：IL-12基因；逆转录病毒；宫颈癌
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