复苏促进因子结合蛋白A的原核表达及对耻垢分枝杆菌的促生长作用
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师长宏 赵勇 毛峰峰 张海 白冰 江鹰 第四军医大学实验动物中心;
【摘要】目的:在大肠埃希氏菌中表达结核分枝杆菌复苏促进因子结合蛋白A(resuscitation-promoting factor-interacting protein A,RipA),观察该蛋白对耻垢分枝杆菌的促生长作用。方法:采用PCR方法,从结核分枝杆菌H37Rv的DNA中扩增出编码RipA蛋白的Rv1477基因,测序正确后克隆入原核表达载体pProEx HTa,构建重组表达质粒pProEx HTa-RipA。以重组质粒转化大肠杆菌DH5a,筛选阳性重组菌株,经异丙基硫代-β-D半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside IPTG)诱导RipA表达,在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化。将纯化的RipA蛋白加入到耻垢分枝杆菌中,分光光度法测定细菌的A600,观察RipA蛋白的促生长作用。结果:成功扩增了Rv1477基因,并克隆于表达载体pProEx HTa中,经酶切鉴定获得阳性克隆。经诱导在大肠杆菌中表达出相对分子量为52kDa的目的蛋白,Western-blot结果显示该蛋白与6×His单抗有特异性的反应条带。采用Ni+-NTA柱可获得纯化的目的蛋白。100pM的RipA蛋白可显著促进耻垢分枝杆菌休眠菌的复苏和生长。结论:RipA蛋白在大肠杆菌中成功表达,并能有效促进耻垢分枝杆菌的生长。
【关键词】 复苏促进因子 结核分枝杆菌 表达 休眠
【基金】国家“863”专项课题(2007AA02Z473) 国家自然科学基金(NO.30972767) 陕西省自然科学基金(SJ08C203)
【分类号】Q51
前言复苏促进因子结合蛋白A(resuscitation-promoting factor(Rpf)-interacting protein A,RipA)蛋白,即细菌复活促进因子(Resuscitation-promoting factor,Rpf)结合蛋白位于细胞膜,与Rpf蛋白一样为肽聚糖水解酶,两者结合形成的复合物在细菌复苏时可促进细胞的分裂[1]。原核
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复苏促进因子结合蛋白A(rcscitation-promoting factor(RpO-interacting protein A，mpA)蛋白，即细菌复活促进因子(Resuscitation—promotingfactor，Rpf)结合蛋白位于细胞膜，与Rpf蛋白一样为肽聚糖水解酶，两者结合形成的复合物在细菌复苏时可促进细胞的分裂。
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