核糖体基因区打靶载体电转染肝细胞的孵育条件的优化
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曹善仁 刘慕君 刘雄昊 伍汇慧 邬玲仟 梁德生 中南大学医学遗传学国家重点实验室;
【摘要】目的:提高核糖体基因区打靶载体的转染效率,优化其电转染肝细胞的孵育条件。方法:在其它电转染参数一致的前提下,设计了6组不同的孵育条件,通过分析转染后细胞活率以及48h后目的基因GFP的表达效率,来比较多组不同的孵育条件对电转染效率的影响。结果:6组条件中,转染前21℃,1min,转染后21℃,1min孵育,得到的转染效率最优,比其它的条件得到的转染效率高50%。结论:孵育条件的优化能提高为核糖体基因区靶向表达载体在体外电转染肝细胞的转染效率。
【关键词】 核糖体基因区打靶载体 电转染 孵育条件
【基金】国家重点基础研究发展计划(2010CB529903) 国家高技术研究发展计划(2007AA021002和2007AA021206) 国家自然科学基金(30700458和30971298)
【分类号】Q75
前言基因治疗开展以来,基因治疗载体就被认为是其核心问题。由于病毒载体存在安全隐患,本室长期致力于非病毒载体的研究,已成功地构建了一种新型的人源基因载体--核糖体基因区靶向表达载体(pHrneo),该载体能携带外源基因以10-4～10-5的效率定点整合到人核糖体基因区。本室利
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前言
基因治疗开展以来，基因治疗载体就被认为是其核心问题。由于病毒载体存在安全隐患，本室长期致力于非病毒载体的研究，已成功地构建了一种新型的人源基因载体一核糖体基因区靶向表达载体(pHmeo)，该载体能携带外源基因以10-4～10-5的效率定点整合到人核糖体基因区。本室利用该载体高效地将改造型的凝血因子Ⅷ定点靶人到人纤维肉瘤细胞(HT1080)的核糖体DNA区，并进行了有效表达。但是，非病毒载体转染效率不高，是我们不能通过体外转染的途径进行临床实验的一个难题。为了将该载体系统更好地应用到遗传病的基因治疗中去，有必要摸索并优化该载体转染人正常细胞的条件。
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