抑制Notch-1基因表达的siRNA重组腺相关病毒载体的构建及滴度测定
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任松涛 姚维成 栗世方 郭磊 青岛大学医学院附属医院神经外科;
【摘要】目的:构建并制备携带靶向干扰Notch-1基因shRNA的重组腺相关病毒载体。方法:设计针对Notch-1的靶DNA序列,构建重组质粒pAAV-MCS2/siRNA-Notch-1,将该质粒和腺相关病毒包装质粒pAAV-RC,腺病毒辅助质粒pHelper共转染QBI-293A细胞,包装成带有Notch-1基因的重组腺相关病毒。结果:PCR鉴定分析结果表明成功构建针对Notch-1的siRNA重组腺相关病毒载体,滴定法测定重组病毒载体基因组得到滴度为1.2×1012VP/L的高滴度腺相关病毒。结论:成功构建携带Notch-1基因短发夹状干扰RNA的腺相关病毒载体,为探索Notch-1基因在胶质母细胞瘤肿瘤干细胞中的作用提供实验基础。
【关键词】 Notch-基因 小RNA 重组腺相关病毒
【基金】山东省自然科学基金项目(Y2008C58)
【分类号】R341
前言Notch信号是一个在进化过程中高度保守的信号通路。它通过细胞间相互作用的方式精确地调节着细胞的分化、增殖和凋亡[1]。RNA干扰(RNAinterferenceRNAi)是由双链RNA介导的特异性转录后基因沉默技术[2-3]。腺相关病毒(AAV)是一种对人体无致病性且免疫反应轻微的人源性病毒
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前言
Notch信号是一个在进化过程中高度保守的信号通路。它通过细胞间相互作用的方式精确地调节着细胞的分化、增殖和凋亡。RNA干扰(RNA interference RNAi)是由双链RNA介导的特异性转最后基因沉默技术。腺相关病毒(AAV)是一种对人体无致病性且免疫反应轻微的人源性病毒,其介导的基因转移系统可使外源基因持续稳定表达,可受周围基因的调控,宿主范围广,包括分裂期和非分裂期的多种细胞。本实验将RNA干扰技术与腺相关病毒包装相结合,成功制备出能有效下调Noteh-1基因的重组腺相关病毒介导的RNA干扰重组体,为下一步探索Notch-1信号转导途径在肿瘤干细胞中的作用提供实验基础。
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