郭峰，钱宝华，花美仙

    血液循环的血液固有免疫系统由血浆补体固有免疫子系统、红细胞固有免疫子系统、血小板固有免疫子系统和白细胞固有免疫子系统构成[1]。若采用系统生物学的复杂理论和数学公式计算探讨这些子系统之间的网络关系，则必须通过在体外建立系统模式进行系统免疫学实验研究[2]。根据研究目的不同，设计不同的系统模式，我们已建立了相关体外系统模式[3-4]，并朝着计算免疫学方向发展，在卡介苗治疗肿瘤的免疫以及中药多糖等生物免疫调节剂作用机制研究等[5]多方面有所应用，我们在红细胞固有免疫活性研究的基础上，逐步发展与形成系统血液固有免疫学的新概念，发现所有血细胞都具有固有免疫活性，可在体外用免疫原激活系统血液固有免疫反应，体外系统实验免疫模式的建立，为系统免疫学提供了崭新的研究方法，为寻找炎症免疫反应中关键免疫分子带来了新的希望。下面为有关系统血液免疫反应网络关系的初步应用实验。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂和仪器

    枸橼酸抗凝新鲜血来自长海医院血站 10 例青壮年献血人员；IL-6、IL-10、IL-12 免疫酶联试剂盒购于上海茂元公司；C4 抗血清购于美国 DADE Behring 公司；鼠抗人 CD35-单抗购于丹麦 DAKO 公司；FITC 标记羊抗鼠 IgG 购自上海华美生物有限公司；FITC 标记鼠抗人CD55-单抗和 PE 标记鼠抗人 CD59-单抗购于美国 BD 公司。BD-Facscan 型流式细胞仪为美国 BD 公司产品；DADE Behring BNProspec 速率散射比浊法测定仪购于美国DADE Behring 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 全血细胞悬液制备 将 3 ml 新鲜枸橼酸抗凝新鲜血 2500 r/min，离心半径 20cm，离心 5min 后取上层血浆至另一试管(含血小板的血浆)中。在原试管中用生理盐水恢复血细胞沉淀为原体积 3 ml，混匀后为全血细胞悬液(含红细胞和所有血细胞)。

    1.2.2 白细胞悬液制备 采用冰水破坏法[4]，取 2 支 10 ml试管，取 0.2 ml 全血细胞悬液，加蒸馏水 4 ml 混匀，在冰水中轻轻吹打 1min，然后用高渗盐水(含氯化钠 1.8%)4 ml 混匀，再加生理盐水至满，2500 r/min，离心半径 20cm，3min 离心，弃上清液即得 0.2 ml 白细胞悬液(其中白细胞数量与全血细胞悬液中白细胞数量相同)。

    1.2.3 S180 癌细胞激活全血细胞与白细胞固有免疫反应 每个待测新鲜标本(静脉采血后 2 h 之内)都设立免疫原激活全血组(自然实验组)、生理盐水全血对照组(自然对照组)、免疫原激活白细胞组(分离实验组)和生理盐水白细胞对照组(分离对照组) ......