解茹，张贵锋，高建萍，王明林，马润宇，苏志国

    温度和pH对重组人血管内皮抑制素脱酰胺的影响

    解茹，张贵锋，高建萍，王明林，马润宇，苏志国

    100029 北京化工大学生命科学与技术学院(解茹、马润宇)；100190 北京，中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室(张贵锋、苏志国)；271018 泰安，山东农业大学食品学院(高建萍、王明林)

    利用液质联用技术研究温度和 pH 对重组人血管内皮抑制素中天冬酰胺(Asn)脱酰胺过程的影响。

    在不同的温度和 pH 值条件下，对重组人血管内皮抑制素样品溶液进行孵化，酶解处理后利用液质联用技术识别发生脱酰胺的多肽并测定其含量随样品放置温度和 pH 条件的变化。

    质谱分析结果表明酶解产物中多肽 SVWHGSDPNGR序列中的 Asn 发生了脱酰胺化，Asn 残基生成了天冬氨酸和异天冬氨酸残基，其他位置的 Asn 均未检测出明显的脱酰胺化；实验获得了不同温度和 pH 条件下重组人血管内皮抑制素中 Asn 脱酰胺化的速率及动力学常数；Asn 脱酰胺过程随着温度和溶液pH 值的升高，Asn 脱酰胺速率上升。

    重组人血管内皮抑制素中天冬酰胺的脱酰胺过程受储存温度和 pH 值影响，研究药用蛋白质在不同条件下的脱酰胺过程对于筛选合适的储存条件、减少活性损失具有重要意义。

    血管抑制素类； 天冬酰胺； 肽类；色谱法，高压液相

    蛋白质中 Asn 或 Gln 残基均可发生非酶催化的脱酰胺化，但 Gln 的脱酰胺速率远低于 Asn[9]。Asn 的脱酰胺包括两步反应，先形成五元环的琥珀酰亚胺，再发生环内酰胺键水解(图 1)。环内酰胺键断裂可发生在琥珀酰亚胺的任何一端并形成天冬氨酸(Asp)和异天冬氨酸(isoAsp)，但最终蛋白中的脱酰胺产物多为 Asp，其可能是 Asp 作为天然氨基酸更能稳定存在于蛋白质结构中[10]，Asn 的脱酰胺速率受蛋白质的氨基酸序列及三维结构、储存温度和pH值、离子种类和离子强度等因素影响[9-11]。在脱酰胺位点识别方面，离子交换色谱因分离含 Asp 与 IsoAsp 多肽存在一定难度导致其用于脱酰胺化研究存在局限性[12]。羧酸甲基转移酶法分析 Asn 脱酰胺位点具有特征性强等优点，但检测过程繁琐且需要使用难以获得的工具酶 ......