谭愈昱，林健，晋溶辰，唐炜立，黄干，彭健，周智广

    ·论著·

    短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法的建立及其应用

    谭愈昱，林健，晋溶辰，唐炜立，黄干，彭健，周智广

    目的建立短片段扩增杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因的序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)分型法。

    受体，KIR； 聚合酶链反应； 基因

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2010, 5(3):165-170

    杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobin-like receptor，KIR)基因编码一族激活性和抑制性 KIR 受体，表达在 NK 细胞和部分 T 细胞表面，通过特异性识别靶细胞表面的MHC-I 类分子，转导激活或抑制信号，从而调节NK 细胞和 T 细胞的活性[1]，在抗感染、肿瘤监测、移植免疫和自身免疫性疾病等方面发挥重要作用。KIR 基因具有高度多态性，目前已明确的有 16 个KIR 基因，其检测方法主要为序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP)。但同一 KIR 基因及其等位基因的检出率因所采用的特异性引物以及相应的扩增产物长度的不同而不同。扩增产物为长片段(0.5 ～ 2 kb)者，对样本基因组 DNA 的要求高，增加 KIR 基因的漏检率。同时，随着 KIR 新等位基因和新座位的发现，既往的 PCR-SSP 分型方法存在漏检和误检的可能。因此，本研究在 Vilches等[2]工作基础上建立短片段扩增 KIR 基因的PCR-SSP 分型法，将其与长片段扩增 KIR 基因的PCR-SSP 分型法进行比较，并检测湖南汉族人群KIR基因的分布频率，初步评价其应用效果。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 标本来源 通过流行病学调查、健康体检等方式，在排查自身免疫性疾病、糖尿病、肿瘤等疾病史及家族史后，随机选取 330 例湖南汉族健康志愿者，签署知情同意书后，抽取 4 ml EDTA 抗凝全血，备用于基因组 DNA 的提取。

    1.1.2 试剂与仪器 Taq DNA 聚合酶和 dNTP购自加拿大 Formentas 公司；DNA Marker 购自天根生化科技(北京)有限公司；用于提取 DNA 的饱和酚、酚-氯仿、异戊醇均购自上海生工生物工程技术服务有限公司；蛋白酶 K 购自美国 Amresco公司；5 例已知基因型的标本(标本 1：KIR2DL1、KIR2DL3 和 KIR3DL1 阳性；标本 2：KIR2DL2、KIR2DS2 和 KIR3DL1 阳性；标本 3：KIR2DS4、KIR3DS1 和 KIR2DS5 阳性；标本 4：KIR2DL5阳性；标本 5：KIR2DS1 阳性)由瑞典 Karolinska学院的 Carani 教授馈赠；GelDoc2000 凝胶成像系统为美国 Bio-Rad 公司产品 ......