高嫦娥，洪敏，刘为青，何敏洁，缪延栋，王苗，吕加令，董坚

    乳腺癌特异性转导小肽融合表达载体的构建以及目的蛋白的表达

    高嫦娥，洪敏，刘为青，何敏洁，缪延栋，王苗，吕加令，董坚

    【摘要】

    目的构建乳腺癌特异性转导小肽 PI-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白的原核表达载体，并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。

    方法合成 PI 的 DNA 序列，将其定向插入到 p EGFPN2中，经双酶切获取 PI-EGFP 的核苷酸序列，再将其克隆入原核表达质粒 pET-28a(+)，构建出 pET-28a(+)-PI-EGFP 的原核表达载体；重组质粒转化 BL21(DE3)pLysS 感受态细胞，经 IPTG 诱导表达，利用 His-tag 对蛋白进行分离纯化，SDS-PAGE 电泳和蛋白质印迹免疫分析(Western blot)鉴定纯化蛋白质。

    结果成功构建了 pET-28a(+)-PI-EGFP 的原核表达载体；其经诱导后，在大肠杆菌中高效表达，目的蛋白以可溶性形式存在；SDS-PAGE 分析显示，在相对分子量约 33 kD 的位置出现目的蛋白条带，与理论值相符；经 His TALONTMCartridge 亲和层析纯化获得了高纯度的重组的 PI-EGFP融合蛋白，Western blot 鉴定结果显示获得了目的蛋白。

    结论成功构建出乳腺癌特异性转导小肽 PI-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白原核表达载体，并能够表达出 PI-EGFP的融合蛋白，为进一步研究小肽的乳腺癌特异性转导功能奠定基础。

    【关键词】乳腺肿瘤； 重组融合蛋白质类； 绿色荧光蛋白类

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2010, 5(3):177-180

    PI，乳腺癌特异性转导小肽，是利用表达 108多肽序列的 pC89 噬菌体肽库与人乳腺癌细胞MDA-MB-231 共培养筛选出的一条肿瘤细胞特异性十一肽 CASPSGALRSC[1-3]。其具有乳腺癌细胞MDA-MB-231 的特异性，而与其他乳腺癌细胞株，以及其他组织来源实体瘤细胞株，尤其是人体正常细胞株无亲和性，不能穿过这些细胞的胞膜进入细胞内。GFP 的突变体——增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(64 位苯丙氨酸→亮氨酸)，作为一种报告基因来研究基因表达、调控、细胞分化及蛋白质在生物体内定位和转运等[4]。

    本研究拟制备乳腺癌特异性转导小肽与增强型绿色荧光蛋白的融合蛋白，利用增强型绿色荧光蛋白的发光特性，使观察小肽在体内的分布情况成为可能 ......