许莹，郭巍，王世霞，黄文强，张璐，卢山，周建华，相文华，黄祖瑚

    H3N8 型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究

    许莹*，郭巍*，王世霞，黄文强，张璐，卢山，周建华，相文华，黄祖瑚

    【摘要】

    目的研发一种具有良好免疫原性的 H3N8 型马流感血凝素(hemagglutinin，HA)核酸疫苗。

    方法根据马 A 型流感病毒 A/Equine/Xinjiang/3/08(H3N8)的 HA 蛋白序列，经密码子优化后化学合成能够表达相应蛋白的基因片段，并将该片段克隆到核酸疫苗载体 pJW4303中，构建带有天然信号肽的 H3HA 核酸疫苗，命名为H3HA/XJ3-08-wt；进一步对 HA 基因进行修饰，以人组织纤维蛋白酶原激活剂(human tissue plasminogen activator，tPA)取代 H3HA 天然信号肽，命名为 H3HA/ XJ3-08-tPA，或切除部分 HA 的基因片段使之只表达 HA 蛋白的胞外域，命名为 H3HA/XJ3-08-dTM。用这 3 种重组质粒分别转染 293T 细胞，蛋白表达经蛋白质印迹检测得到确认。采用电转录法免疫新西兰白兔。ELISA 方法检测免疫后兔血清中抗 H3HA 抗体滴度，血凝抑制实验(hemagglutination inhibition，HI)检测保护性抗体水平。

    结果3 种 H3HA 核酸疫苗均可在 293T 细胞中高效表达，并能够在新西兰白兔体内诱导产生特异性抗 H3HA 抗体，HI 检测到不同水平的保护性抗体。其中以 H3HA/XJ3-08-tPA 的免疫原性最强。

    结论新构建的 H3N8 型马流感血凝素核酸疫苗具有良好的免疫原性，为此类疫苗的进一步研发奠定了基础。

    【关键词】流感病毒 A 型，H3N8 亚型； 血凝素类；疫苗，DNA

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2010, 5(3):196-201

    近年来，A 型流感在不同物种中广泛流行，如高致病性禽流感 H5N1、新型猪来源 H1N1 流感等。A 型流感同样在马属动物中频繁爆发。国际上根据流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)的不同，将 HA 分成了 16 个亚型，NA 分成 9 个亚型。其中马流感病毒包括 H7N7 和 H3N8 亚型。近 30 年来，H7N7 型马流感病毒未再分离到，而 H3N8 型马流感在世界范围内常有爆发，提示现有疫苗还不能有效地控制该病毒的流行[1-7] ......