卢陆洋，秦竹，徐金库，李新松

    一株产紫杉醇内生真菌的分离及其代谢产物的研究

    卢陆洋，秦竹，徐金库，李新松

    【摘要】

    目的从南方红豆杉(Taxus chinensis var. mairei)中分离产紫杉醇内生真菌，并研究其抗肿瘤细胞活性。

    方法采用组织块法从南方红豆杉的树根部、树主干内层、侧枝及针叶分离纯化内生真菌，经液体发酵培养，抽提发酵粗产物，以标准紫杉醇为对照进行薄层层析(TLC)、紫外光谱(UV)、HPLC、质谱(MS)分析。同时将经上述方法确认后的内生真菌产的紫杉醇作用于人宫颈癌 HeLa 细胞，采用 MTT 法分析其抗肿瘤细胞活性。

    结果从南方红豆杉主干韧皮部分离得到 1 株产紫杉醇内生真菌 D62，其紫杉醇产量为 148.95 μg/L。对菌株 D62 的菌落和菌丝体的形态学分析表明其属于镰刀属(Fusarium sp.)。将该菌株产紫杉醇作用于 HeLa 细胞，表现出明显的致细胞凋亡作用。

    结论南方红豆杉中分离得到的产紫杉醇内生真菌 D62具有优良的发酵特性。

    【关键词】抗肿瘤药，植物； 真菌； 发酵； 红豆杉属

    www.cmbp.net.cn 中国医药生物技术, 2010, 5(3):202-207

    紫杉醇(Paclitaxel，商品名 Taxol) 是复杂的二萜类衍生物，最早于 1971 年由 Wani 等[1]从短叶红豆杉(Taxus breviifolia Nutt.)的树皮中分离，具有独特的催化微管蛋白迅速合成微管作用，并可与微管结合，防止微管解聚[2]。紫杉醇对卵巢癌、乳腺癌等，尤其对耐常规药物的肿瘤有较好的疗效，被美国肿瘤研究所认为是人类未来 20 年最有效的抗癌药物之一。

    目前，紫杉醇主要从红豆杉的树皮中提取。由于红豆杉生长周期长，资源缺乏，且天然红豆杉在世界范围内数量很少，而树皮中紫杉醇含量仅为干重的 0.01% ～ 0.03%，仅仅从树皮中提取紫杉醇无法满足市场需求，造成了紫杉醇市场价格昂贵的同时，也严重破坏了自然资源[3]。为此，国内外学者不断研究生产紫杉醇的其他方法，包括紫杉醇的化学全合成和半合成，红豆杉愈伤组织培养和细胞悬浮培养等[4-6]。然而因为这些方法成本高、产率低，目前还无法应用于工业生产。

    1993 年，Stierle 等[7]首次报道短叶红豆杉中分离出了可产紫杉醇的内生真菌 Taxomyces andreanae，这为生产紫杉醇提供了潜在新途径。内生真菌生长迅速，培养基成本相对较低 ......