房青，高福云，徐梅，张文健，叶丽亚，许世清，许亚平，李成辉，娄晋宁

    急性肝衰竭(acute liver failure，ALF)是病毒性肝炎一种危重的临床综合征，由于起病急，疗效差，患者生存率不足 20%[1]。虽然肝移植是 ALF有效的治疗措施，但由于肝供体的严重缺乏，大多数患者在等待供体过程中死亡。生物人工肝支持系统(bioartificial liver support system，BALSS)被认为是未来最有希望在体外提供全面肝功能支持的有效治疗方法[2]。

    BALSS 的关键生物材料是肝细胞。虽然，新鲜分离的猪肝细胞和人的肝细胞瘤细胞都曾经被应用作为生物人工肝的细胞材料，但由于这些细胞存在过敏反应、病毒感染和诱发肿瘤等不安全因素，其临床治疗应用受到很大限制。因此，建立一种永生化人肝细胞系对 BALSS 的建立具有非常重要的意义[3-4]。

    我们应用 SV40 Tag 和端粒酶转染原代人肝细胞，并通过单细胞克隆筛选建立了永生化人肝细胞系(immortalized human hepatocytes，IHH)。前期的研究表明，IHH 表现高增殖活性，可在微载体上高密度培养，体内不具有成瘤性。体外分析表明：IHH 具有正常肝细胞的主要功能特性，表达与肝脏解毒、代谢、合成和生物转化相关的基因和蛋白。将 IHH 与重症肝衰竭患者血清孵育后，可使血清胆红素进行性地降低，血清尿素氮(BUN)浓度进行性升高，表明我们建立的 IHH 具有对胆红素和血氨的解毒功能[5]。在本研究中，应用微载体培养的 IHH，注射到 ALF 小鼠的腹腔内，进行腹膜透析治疗，评价其对 ALF 小鼠的治疗作用，以评价IHH 对 ALF 鼠提供肝功能支持的有效性，为利用IHH 构建人源化生物人工肝提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    1.1.1 试剂 cytoporeTM2 微载体购自瑞典 GE Healthcare 公司；活细胞计数试剂盒 CCK-8 购自日本 Dojindo 公司；小鼠抗人 α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin，α1-AT)抗体购自美国 Sigma 公司。

    1.1.2 实验动物 BALB/c 裸鼠，雄性，SPF 级，6～8 周龄，体重 18～22 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

    1.2 方法

    1.2.1 IHH 细胞的微载体培养 1 g cytoporeTM2微载体用 100 ml PBS(pH 7.4)水化 ......