张秀敏，史琪琪，李增山，叶菁，王军伟，林慧，曲萍，胡沛臻，隋延仿

    肿瘤多肽疫苗因其具有化学性质稳定、易于制备和保存、肿瘤型别通用性强、治疗费用相对较低等优势而成为肿瘤免疫治疗的新方法。众所周知，疫苗疗效的关键在于其抗原，而有效的抗原递呈是肿瘤免疫治疗中不可缺少的重要环节。MAGE-n 基因是我室首次发现的 MAGE 家族中的新成员[1]，肝癌阳性率达 40%，该基因的表达模式与其他MAGE 基因相同，可作为肿瘤特异性免疫治疗的靶分子。后续研究中，我们应用表位预测结合免疫重建等技术筛选出一条具有特异性免疫活性的HLA-A2 限制性 CTL(cytolytic T lymphoeyte)表位 MAGE-n(159-167)QLVFGIEVV，经免疫学实验证实，体内外均可有效地诱导特异性 CTL 的产生，有效杀伤肿瘤细胞[2]。文献[3]和我们以往的工作表明，将 HSP70(heat shock protein，HSP)与肿瘤肽复合物联合制成疫苗能够激发抗原特异的CTL 反应。本研究选择 HSP70 为载体，构建MAGE-n 表位肽与 HSP70 的融合基因，并进行表达纯化。期望利用 HSP70 的分子伴侣作用加强APC(antigen presenting cell)细胞对抗原的加工递呈，以增强其免疫原性，为构建新型的肿瘤疫苗提供更有效的抗原奠定实验基础。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    菌种E.coliBL21(DE3)、原核表达载体pET-28a(+)、含 HSP70 基因全长片段的质粒pCDNA3.1(+)/HSP70 均由本室保存；质粒小样快速提取试剂盒和小量 DNA 片段快速胶回收试剂盒购自北京博大泰克生物基因技术有限责任公司；Pyrobest DNA 聚合酶、T4 连接酶、限制性内切酶购自日本 TaKaRa 公司；Ni Sepharose 6FF 亲和层析填料购自美国 GE 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 采用 PCR 法构建 QLVFGIEVV 与 HSP70的融合基因 根据引物设计原则以及 HSP70 基因的核苷酸序列，分别设计上游引物 Mn70-1 及下游引物 Mn70-2，在下游引物中加入 QLVFGIEVV的核苷酸序列(共 27 个碱基) ......