曾军，王雪丁，陈宏远，黄民，杜军

    细胞色素酶 P450 3a(CYP3a)负责许多内源性和异生化合物的氧化代谢，是人体肝脏和小肠最丰富的 CYPs，参与毒素、致癌物质、胆汁酸、类固醇激素以及超过 50%临床用药等的初级代谢。CYP3a11 是小鼠肝内微粒体中优势表达的 CYP3a基因[1]，在功能上与人类的 3a4 相类似，但 CYP3a的药物代谢谱存在着明显的种系差异[2]，这给动物药物实验的有效性带来挑战。利用基因敲除技术构建药物代谢酶基因缺陷型小鼠和人源化小鼠，可为深入研究药物代谢酶的功能、药效学和药物致癌等提供有效模型[3]。基于此，我们设计并构建了小鼠药物代谢酶 CYP3a11 基因敲除载体，并对小鼠E14 胚胎干细胞(embryo stem cell，ES cell)的CYP3a11 基因进行了敲除，为进一步制作 CYP3a11基因缺陷型小鼠作准备。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 质粒、菌株和 ES 细胞株 质粒 pBluescript II SK+phagemid 为美国 Stratagene 公司产品；pCR2.1-TOPO 为美国 Invitrogen 公司产品；大肠杆菌 DH5α 由本室保存；129 品系小鼠 E14 ES细胞株为中科院上海生化与细胞研究所提供；ES细胞培养及筛选所需要的支持细胞来自其他基因敲除小鼠孕 12.5 d 原代培养的胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast，MEF)。

    1.1.2 工具酶、试剂盒及其他试剂 所有引物均为上海生工生物工程技术服务有限公司产品；限制性内切酶、T4DNA 聚合酶、T4DNA 连接酶、Taq酶和 PfuUltra? 酶分别购自美国 Promega、NEB、Stratagene 公司；pfu T/A 克隆试剂盒为上海生物工程公司产品；QIAEX II 凝胶回收试剂盒为德国QIAGEN 公司产品；Ganc 和 G418 sulfate 购自美国 Gibco 公司；α-32P-dCTP 为美国 Amersham 公司产品；标记探针用缺口平移试剂盒是华美生物工程公司产品；1 kb ladder DNA plus 核酸分子量标记购于美国 Invitrogen 公司；Defined 胎牛血清购自美国 Hyclone 公司；重组小鼠白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor，LIF)购自美国Millipore 公司；牛蛋白胨、琼脂糖试剂分别购自美国 Sigma 和 Biorad 公司；其他化学试剂均为分析纯 ......