孙旭妍，陶敏芳，程蔚蔚，王玉东

    自雌激素受体(ER)β亚型被克隆出来后，体外实验发现2种ER亚型在成骨细胞内均有表达，经脱氢表雄酮(DHEA)体外作用后，成骨细胞 ERα亚型的转录水平无明显变化，而 ERβ亚型的转录水平则明显增高，且骨保护因子(OPG)与ERβ的转录水平呈线性正相关[1-2]。由于天然雌二醇(E2)与ERα和ERβ的活化蛋白-1(AP-1)位点结合后，可表现出不同的信号转导：与ERα结合后激活转录，而与ERβ结合后则抑制转录[3]。因此，我们尝试在体外利用小干扰RNA(siRNA)技术构建 ERβ 沉寂表达载体，以明确 ERβ是否在防治绝经后骨质疏松中发挥主要作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞与质粒 人成骨 hMG63 细胞株购自美国模式菌种收集中心(ATCC)，慢病毒载体系统购自日本 Toyobo公司，该载体系统由含有 H1 启动子和可调控 GFP 表达的EF1-alpha 启动子的pLVTHM-GFP 质粒，以及含有病毒包装所必需元件的pRsv-REV、pMDlg-pRRE和pMD2G 质粒组成。

    1.1.2 主要试剂与仪器 总RNA提取试剂(Trizol Reagent)购自日本 TaKaRa公司；第一链cDNA 合成试剂盒(ReverTra Ace-α First Strand cDNA Synthesis Kit)、Realtime-PCR 试剂盒(QPK-101)、T4 DNA 连接酶和LGK-100 核酸电泳仪均购自日本 Toyobo公司；限制性内切酶 MluI、ClaI购自宝生物工程(大连)有限公司；大肠杆菌 E.coli DH5α 感受态细胞购自美国 Invitrogen公司；100 bp DNA ladder(M-DNA-100 bp)购自美国 Axygen公司；恒温水浴锅和Fine-do X1 数码凝胶图像处理系统购自上海天能科技有限公司；Eppendorf RealPlex4 Realtime-PCR 仪购自德国Eppendorf公司；其他生化试剂均购自上海生工生物工程技术服务有限公司 ......